Trypanosoma cruzi posee actividad Lisofosfolipasa A in vivo

BELAUNZARÁN ML,; GIMÉNEZ G,; BOTT E,; LAMMEL EM,; ISOLA ELD

Santa Fe, Argentina

Otro; XXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2009

Sociedad Argentina de Protozoología

Previamente determinamos en amastigotes (AMA) y tripomastigotes (TRP) de T. cruzi actividad Fosfolipasa A1 (PLA1), asociada a membrana/secretada y significativamente mayor que en epimastigotes (EPI) (Belaunzarán y col. 2007). La acumulación de ácidos grasos libres (AGL) y lisofosfolípidos (LPL) durante la autólisis parasitaria, sugiere además la existencia de actividad LisoPLA1 (LPLA) asociada a PLA1 (Wainszelbaum y col. 2001). Numerosas evidencias relacionan PLA1 de tripanosomátidos con patogénesis. En T. brucei induciría daño celular per se o por generación de AGL y LPC desde PL parasitarios o del huésped (Tizard y col. 1978) y participaría en el mecanismo para evitar la toxicidad de LPL y AGL (Bowes y col. 1993). En T. cruzi, se observó en nidos de AMA en degeneración una marcada respuesta inflamatoria, sugiriendo que los productos de hidrólisis de fosfolípidos (PL)  parasitarios son responsables de este efecto (Tafuri, 1979). Se demostró además el efecto tóxico de AGL y LPL liberados de TRP sobre cultivos celulares (Asahi y col. 1986). En el presente trabajo se determinó la actividad LPLA in vivo en los diferentes estadíos de T. cruzi y el destino de los lípidos generados por dicha actividad. Se incubaron 107 parásitos/ml + 0.2 mCi/ml de 2-[14C] oleoil-LPC 0, 15, 30 y 60 min y los lípidos de los parásitos/sobrenadantes (SB) se extrajeron y separaron por TLC. AMA y TRP incorporaron e hidrolizaron parcialmente la LPC a AGL, confirmando la actividad LPLA in vivo. La presencia de LPC y AGL en los SB, sugiere que dicha actividad en AMA/TRP está asociada a membrana/secretada. Se observó además biosíntesis de novo de fosfatidilcolina (PC). Los EPI incorporaron e hidrolizaron completamente la LPC con generación de AGL y biosíntesis de PC, diacilglicerol (DG), fosfatidiletanolamina (PE) y triacilglicerol (TG). En contraste con AMA/TRP, en los SB de EPI no se detectaron lípidos marcados. Se incubaron luego AMA/TRP (107/ml) con 1 μCi/ml [14C] oleato 0, 15, 30 y 60 min y procesaron como se describió. Ambos incorporaron AO en PC, PE y TG, al igual que EPI (Wainzelbaum y col. 2003), requiriendo al menos 30 min para metabolizarlo. En los SB sólo se observó el AO no incorporado. Estos resultados confirman la existencia en T. cruzi de actividad LPLA in vivo, la cual protegería al parásito de la toxicidad de LPL generados por la PLA1, favoreciendo su sobrevida. Ambas actividades enzimáticas, involucradas en el metabolismo de los PL/LPL, constituirían además un potencial blanco quimioterapéutico.