Evaluación del daño genotoxico de cadmio y arsénico sobre un pez nativo

GONZÁLEZ NÚÑEZ, AYELEN A.; OSSANA N A

Buenos Aires

Jornada; XXXVI Jornadas Interdisciplinarias de Toxicologia; I Jornada Virtual Iberoamericana de Toxicologia; 2020

ATA

La presencia de metales en el medio ambiente es un problema persistente a lo largo de los años. El cadmio (Cd) y el arsénico (As) son dos elementos presentes en los ambientes acuáticos. Cnesterodon decemmaculatus es un pez pequeño que habita la zona pampeana y que se ha utilizado ampliamente en ensayos de toxicidad. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto genotóxico de la exposición subletal a Cd y As en adultos de C. decemmaculatus mediante el ensayo cometa (EC), test de micronúcleos (MN) y aberraciones nucleares (AN) en eritrocitos de sangre periférica. Se realizaron dos ensayos subcrónicos (12 días) en condiciones controladas de luz (16 h luz/ 8 h oscuridad) y temperatura (23° C). Se seleccionaron 90 animales al azar de cultivo indoor. Los tratamientos fueron: control negativo (agua moderadamente dura ? CN), Cd o As (0,5 ppm) y un control positivo de genotoxicidad (ciclofosfamida 10 ppm - CP). Se realizaron tres réplicas por tratamiento con 5 animales por pecera. A tiempo final, los animales fueron anestesiados en hielo y se les realizó un corte de la médula espinal por debajo del opérculo. Para la técnica de MN y AN se realizó un frotis sobre un portaobjetos. Las muestras fueron fijadas en metanol 100% y teñidas con Giemsa 5%. Se observaron en microscopio óptico con aumento 1000x, se contaron 1500 células y se anotó la cantidad de MN y AN (buds, escotaduras y doble núcleo) por individuo. Para el EC, se extrajo una gota de sangre en 1 ml de PBS (buffer fosfato salino), se centrifugó y el pellet se resuspendió en agarosa. Las células se lisaron y se realizó la corrida electroforética en buffer a pH 13 a 25 mV y 250 mA. Las muestras fueron teñidas con DAPI y se observaron en microscopio de epifluorescencia contabilizando 100 nucleoides por individuo que se clasificaron según el tipo de daño que presentaban (0, I, II, III y IV) y se calculó el Índice de Daño Genómico (IDG). Se evaluó la significancia por ANOVA y test de Tuckey. La cantidad de MN solo fue significativa para el Cd respecto al CN. El total de AN contabilizadas mostró diferencias significativas respecto al CN en los dos tóxicos evaluados. Respecto a las AN cuantificadas los dobles núcleos aumentaron su frecuencia en los peces expuestos a Cd mientras que los peces tratados con As aumentaron las escotaduras significativamente. En ambos ensayos se observó un aumento significativo del IDG con respecto al CN. Sin embargo, el Cd generó un nivel de daño comparable al generado por el CP. Con Cd aumentaron los nucleoides grado III y IV y con As no se encontraron nucleoides grado IV. Las diferencias con el CN estuvieron en el aumento de nucleoides grado II y III. Podemos concluir que ambos tóxicos generan genotoxicidad siendo los efectos del Cd mayores para C. decemmaculatus.Agradecimientos: Este trabajo fue financiado con fondos del PICT 2015-2636, PICT 2016-2694 y el Depto. de Cs. Básicas (UNLu).Acta Toxicol. Argent. (2020) 28 (Supl): 25-81