BRANQUIAS DE LARVAS PREMETAMORFICAS DE LITHOBATES CATESBEIANUS (AMPHIBIA: ANURA): TÉCNICA DE PROCESAMIENTO PARA EL ANALISIS ULTRAESTRUCTURAL EN EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO

SARMIENTO, P L; OSSANA, N A; SALIBIÁN, A

Rosario, Provincia de Santa Fe, Argentina, 25-28 Octubre

Congreso; 10º Congreso Interamericano de Microscopía Electrónica (CIASEM 2009) y el 1er Congreso de la Sociedad Argentina de Microscopía (SAMIC 2009); 2009

CIASEM

Las branquias internas son estructuras morfológicas conspicuas de las larvas de anuros que en esas etapas iniciales de su desarrollo post-embrionario constituyen un órgano respiratorio complementario de la piel. En el transcurso de la metamorfosis las branquias se reabsorben en una secuencia de eventos entre los que destaca el cierre de las hendiduras branquiales, culminando con la transferencia de la función respiratoria a los pulmones y la piel. Las branquias y la piel de los anfibios en estadios larvales premetamórficos son interfases límites de contacto directo entre el medio externo y el medio interno [1, 2]. Las branquias en particular son aptas como bioindicadores sensibles y precoces de los efectos (adversos o tóxicos) de estresores ambientales, ya que en medios alterados responden con alteraciones ultraestructurales de diverso grado, magnitud y especificidad. De allí su utilidad como organismos centinela en estudios de Ecotoxicología Acuática. En dicho marco, el objetivo de este trabajo fue ajustar una técnica de fijación de branquias de larvas jóvenes (estadios 25-26, según Tabla de Gosner [3]) de Lithobates catesbeianus Shaw (sin. Rana catesbeiana), para su estudio en Microscopio Electrónico de Barrido. Los animales fueron incubados en agua potable durante 96 h, con aireación, temperatura y fotoperíodo constantes. Luego se anestesiaron en frío, se les extrajeron las branquias, y se lavaron con solución Ringer anfibio. Posteriormente se fijaron durante 48h con glutaraldehído al 2,5 % en buffer fosfato 0.1 M, pH 7.2. A continuación se procedió a la deshidratación en una escala de concentraciones crecientes (10, 30, 50, 70, 100 %) de alcohol etílico; se realizaron 3 recambios de media hora con cada una de las soluciones; el material fue transferido a acetona absoluta para la realización del secado por Punto Crítico (Balzers modelo CP- 30). Finalmente fue adherido a los tacos con cinta bifas y se procedió a la metalización con oro 99,99% en atmósfera de Argón. Los preparados fueron examinados en un Scanning electron microscope, marca JEOL modelo JSM 6360 LV. Las imágenes logradas muestran una organización del tejido similar a la descripta en otras especies del género Rana [4, 5]. En la Figura 1 se observan los arcos branquiales cartilaginosos formando septos entre las hendiduras branquiales. Las branquias, consisten en filamentos cubiertos por un epitelio ciliado que nace de los arcos branquiales a las hendiduras [4], como puede apreciarse en la Figura 2. Cada filamento branquial está constituido por unidades esféricas arborescentes Figuras 3 y 4. A mayores aumentos, Figuras 5 y 6, el epitelio superficial se observa formado por células poligonales irregulares caracterizadas por la presencia de crestas superficiales; con menor frecuencia se aprecian células ciliadas. Bibliografia citada [1] Duellma WE, Trueb L (1994) Biology of amphibians. J. Hopkins University Press. Baltimore MD. [2] Goin CJ, Goin OB (1971) Introduction to Herpetology. WH Freeman & Co. San Fco, CA. [3] Gosner KL (1960) Herpetologica. 16: 183-190. [4] Bernabó I, Brunelli E, Berg C, Bonacci A, Tripepi S (2008) Aquat Toxicol. 86: 447-456. [5] Brunelli E, Perrota E, Tripepi S (2004) Zoomorphology. 123: 203-211.