Modulación de la actividad enzimática de la acetilcolinestarasa eritrocitaria bovina (AEB) en membranas naturales transferidas a filmes de Langmuir-Blodgett (LB)

FELSZTYNA, I.; PERILLO, M. A.; CLOP, E.M.

Santiago del Estero

Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2015

Sociedad Argentina de Biofísica

La AEB es una enzima de membrana plasmática con un anclaje hidrofóbico tipo GPI. Este contacto permitiría la transmisión de información proteína-interfase, afectando su actividad. En consecuencia, los filmes LB podrían ser utilizados para evaluar los efectos del empaquetamiento molecular de la membrana en la actividad de la AEB.Se prepararon filmes de Langmuir (FL) a partir de suspensiones de vesícula de membranas eritrocitarias bovinas purificadas (MEB) y se estudiaron sus propiedades interfasiales.Las isotermas π-área mostraron una transición bidimensional πt=15,5±1,4 mN/m correspondiente con módulo de compresibilidad Kt=66,04±2,52 mN/m. La π de colapso fue πc=45,4±1,2 mN/m, con un Kc=36,6±0,7 mN/m. Kt y Kc indican un comportamiento de tipo líquido expandido a lo largo de toda la isoterma.Los FL se transfirieron a soportes hidrofóbicos planos a dos π, 10 y 35 mN/m (LB10 y LB35), que se utilizaron para estudiar la cinética de hidrólisis de acetiltiocolina obteniendo tiocolina más acetato. En todos los tratamientos obtuvimos una cinética de tipo michaeliana, a diferencia de lo observado para otras proteínas incorporadas a membranas, donde el aumento de π indujo un cambio de cinética. Con MEB en suspensión obtuvimos una Vmax=3,41±0,15 y KM=0,11±0,02. En LB10, se obtuvo una Vmax=0,021±0,002 y una KM=0,037±0,017, mientras que en LB35, Vmax=0,047±0,003 y KM=0,079±0,023 (Vmax se expresa en nmoles P/min·µg prot. y KM en mM)La exposición de AEB a la interfase aire-agua, modificaría su estructura 3D hacia una conformación de mayor afinidad para la formación del complejo E-S. La disminución de Vmax en los filmes LB respecto a la observado en vesículas, podría deberse a una transferencia selectiva de proteínas desde el FL al soporte sólido. La recuperación de la AEB mejoraría con un mayor empaquetamiento molecular a mayor π de transferencia, reflejado por el aumento significativo en la Vmax si se comparan los LB10 con los LB35.Agradecimientos: Foncyt, Conicet, Secyt y CIN