Efecto del hacinamiento molecular en membranas modelo con glicocáliz en la cinética enzimática de fosfatasa alcalina placentaria

CLOP, E.M.; MARÍA ANGÉLICA PERILLO

Cdad At de Bs As

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

SAB

La fosfatasa alcalina placentaria (FAP) es una proteína que se encuentraanclada a la hemicapa externa de la membrana celular mediante un grupoGPI, estando su parte proteica inmersa en el glicocáliz celular. Los cambiosen las propiedades reológicas y viscoelásticas en las membranas afectan ladinámica del ambiente interfasial donde se encuentra esta enzima, pudiendoejercer un efecto directo sobre la relación estructura/función de FAP. Enconsecuencia, por medio de su actividad catalítica FAP podría servir comobiosensor de los cambios en la organización molecular de la región delglicocáliz en biomembranas.En el presente trabajo se definió una membrana modelo consistente enfilmes de Langmuir (FL) constituidos por una matriz de dpPC donde seagregó un fosfolípido sintético (PE-PEG350, PE-PEG1000 o PE-PEG5000) cuyogrupo polar (polietilenglicol 7, 23 ó 113 monómeros) permitió estructurarun pseudo-glicocáliz de espesor variable, al cual se le incorporó la FAP. LosFL se trasfirieron a presión lateral () constante. Se obtuvieron filmesLangmuir-Blodgett y se evaluó la cinética de hidrólisis de un sustratosoluble.En condiciones de baja, los filmes conteniendo PE-PEG350 no evidenciaroncambios en los parámetros cinéticos debido a que la delgada capa de PEGno introduce grandes restricciones estéricas a la movilidad del sustrato y delproducto. En el caso de PE-PEG1000 y PE-PEG5000 (el espesor de la capa depolímero aumentó) el PEG rodeó a la proteína comportándose como unfluido viscoso continuo donde la actividad catalítica disminuyósignificativamente. A altas, el espesor del PEG aumentó incrementando lasrestricciones difusionales, disminuyendo Vmáx. Al mismo tiempo, la KMaumentó, lo cual sería compatible con el secuestro del sustrato en la capa depolímero. Estos resultados muestran que Vmáx y KM son sensibles tanto algrado de empaquetamiento como a la densidad molecular del agentesuperpoblante, demostrando que la cinética enzimática es una herramientasensible a los cambios experimentados en el ambiente molecular interfasial.Agradecimientos: SeCyT-UNC, Conicet, Foncyt.