Caracterización del eflujo de L-arginina en células adrenales: efecto de ACTH

C MARTINEZ CALEJMAN; EM REPETTO; F ASTORT; M BESIO MORENO; O PIGNATARO; C CYMERYNG

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En trabajos previos sugerimos que la actividad de óxido nítrico sintasa       (NOS) en células adrenales puede ser regulada por el aporte de su sustrato       L-arginina y demostramos un efecto estimulatorio de ACTH sobre el influjo       de L-arginina y la producción de nitritos en la línea celular       adrenocortical de ratón Y1. Asimismo identificamos los transportadores y+       (CAT 1 y CAT2) e y+LAT (CD-98 e y+LAT-2). El objetivo del presente trabajo       fue caracterizar el mecanismo de eflujo de L-arginina en estas células.       Los resultados obtenidos indicaron un eflujo significativo de L-arginina       en ausencia de aminoácidos en el lado opuesto de la membrana que se       incrementó por la presencia de L-Lys (2 mM) o L-Gln (2 mM) en el exterior       celular (B: 83,8 ± 6,4; L-Lys: 167,1 ± 18,6; L-Gln: 185,3 ± 28,9       dpm/min/mg prot, p< 0.05 vs basal). La preincubación en presencia de NEM       inhibió el eflujo en todos los casos. El reemplazo de Na+ por colina       bloqueó el incremento en el eflujo de L-arginina trans estimulado por       L-Gln (Na+: 185,3 ± 28,9; col: 101,6 ± 13.5 dpm/min/mg prot). El eflujo de       L-arginina fue significativamente menor en presencia de ACTH (C: 71,37 ±       9,16 dpm/min/µg proteina vs A: 54,83 ± 16,7 dpm/min/µg proteina; p<0.05).       El tratamiento con inhibidores de PKA, PKC y de PI3K bloqueó el efecto de       ACTH sobre el eflujo de L-arginina.       Conclusiones      La caracterización del eflujo de L-arginina en las células Y1 es       consistente con la expresión y actividad de dos sistemas de transporte de       L-arginina: el y+, dado el efecto inhibitorio del NEM en condiciones       basales y el y+L, que es trans-estimulado por aminoácidos neutros en el       exterior celular pero sólo en presencia de Na+. Este sistema podría       proveer de L-arginina a células vecinas intercambiándola por aminoácidos       neutros y Na+. De acuerdo a resultados previos que demostraban un efecto       estimulatorio de ACTH sobre el uptake de L-arginina los resultados       presentados sugieren que el efecto neto de ACTH es incrementar el influjo       de L-arginina en las células Y1.