INVESTIGADORES
WOITOVICH VALETTI Nadia
congresos y reuniones científicas
Título:
Bioseparación de proteasas pancreáticas empleando métodos no contaminantes
Autor/es:
LOMBARDI JULIA; WOITOVICH VALETTI, NADIA; BOERIS VALERIA; PICÓ GUILLERMO
Lugar:
Rosario
Reunión:
Jornada; V Jornada de Ciencia y Tecnología; 2011
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
Las proteasas pancreáticas son muy utilizadas en la industria alimentaria, farmacológica y cosmética. El empleo masivo de proteasas ha llevado a la necesidad de contar con fuentes de obtención y tecnologías para aislar y purificar las mismas en grandes cantidades a partir de fuentes naturales donde se encuentran. El objetivo general de este trabajo es el diseño de unametodología simple y económica para purificar proteasas en escala industrial, a partir de un residuo no aprovechado de la industria frigorífica local, el páncreas bovino. Se pretende precipitar estas enzimas utilizando poliacrilato, un polímero sintético con múltiples grupos carboxilo, que se desprotona a pH mayores a 4. Este polímero presenta la capacidad de formar complejos solubles e insolubles con proteínas globulares de carga eléctrica opuesta. En estetrabajo se propone la obtención de un extracto concentrado de proteasas pancreáticas (quimotripsina, tripsina y elastasa) por medio de la precipitación de las mismas con este polímero. Los diagramas de solubilidad de las proteasas con poliacrilato permitieron conocer los rangos de solubilidad e insolubilidad de las mezclas proteasas - poliacrilato. A pH entre 3 y 5, la mezcla resultó completamente insoluble debido a que las proteasas se encuentran cargadas positivamente y el polímero negativamente, permitiendo la interacción. Sin embargo, a pH menores a 3 la precipitación se vió disminuída debido a la protonación del polímero que impide la interacción electrostática con las proteasas. Se determinó que el pH más apropiado para la precipitación resultó ser pH 4,50 ya que a otros pH el rendimiento resulta menor.Mediante titulaciones turbidimétricas de las proteasas con poliacrilato en presencia de distintas concentraciones de NaCl se evaluó el efecto de la fuerza iónica en la precipitación. El páncreas bovino fue colocado en hielo y desengrasado en forma manual inmediatamente después de extraído del animal. Se procedió a la homogeneización del tejido mezclando 1 parte del mismo (en peso) por 2 partes de buffer acetato 50 mM pH 4,50. El extracto crudo se filtró a través de un filtro de acero y luego a través de gasa. Para activar los zimógenos se agregaron trazas de tripsina y se incubó durante 3 horas a temperatura ambiente. Se aplicó la precipitación al homogenado, obteniéndose un extracto con un menor contenido de proteínas totales con elevada actividad proteolítica. Mediante precipitación con poliacrilato fue posibleobtener un extracto concentrado de enzimas pancreáticas con actividad proteolítica para su posible uso en la industria. Se eliminó el 70 % de las proteínas de la muestra, enriqueciendo al doble las proteasas en el extracto. Este resultó un método apropiado para su aplicación en macro escala debido a que este polímero es económico, no tóxico, y además, se utiliza en muybajas concentraciones