ESTUDIO DE LA INTERACCIÓN DE LA PEROXIDASA DE RÁBANO (Raphanus sativus) CON POLIELECTROLITOS SINTÉTICOS: Eudragit® L100 y S100.

NADIA WOITOVICH VALETTI ; GUILLERMO PICÓ

Rosario

Congreso; XVIII CONGRESO ARGENTINO DE FÍSICOQUÍMICA Y QUÍMICA INORGÁNICA; 2013

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

Introducción: Las peroxidasas (POD) son hemoproteínas que catalizan la oxidación del H2O2 acoplada a la reducción de diversos sustratos. Son enzimas ubicuas que están relacionadas con una amplia variedad de funciones y por ello poseen un amplio rango de aplicaciones en la industria. En la actualidad, la principal fuente de POD son las raíces de A. Rusticana, la mayoría de los procedimientos utilizados para obtenerla son costosos, extensos y dan bajos rendimientos y actividades específicas. La aplicación de la precipitación con polielectrolitos para la purificación de la POD se presenta como una alternativa económica y no contaminante. Objetivos: En este trabajo se determinaron las condiciones básicas para la obtención de POD a partir de rábanos (Raphanus sativus) utilizando precipitación con dos polímeros sintéticos: Eudragit® L100 (EuL) y Eudragit® S100 (EuS). Resultados: Se analizaron tres aspectos para los sistemas en estudio: pHs a los cuáles precipita la POD, cinética de la precipitación y cantidad de polímero necesaria para alcanzar la máxima precipitación. El material de trabajo consistió de jugo de rábanos en buffer fosfato 50 mM, pH 6.00. La proteína fue determinada mediante medidas de actividad utilizando como sustrato pirogalol y H2O2 siguiendo la reacción por medidas de Absorbancia a 420 nm. Para ambos polímeros el pH para la precipitación fue de 4.00 a 5.00, obteniéndose el mejor rendimiento de precipitación a pH 4.00, la disminución de la precipitación con el aumento del pH fue notable cayendo hasta 6 veces con el aumento del pH a 5.00. Por esta razón se eligieron para trabajar pHs en un rango de valores de 4.00, 4.50 y 5.00. Para el caso del EuS se observó una cinética rápida que llegó al máximo en menos de 1 min y no se vio afectada por el pH. Para el EuL se observó una cinética del tipo exponencial simple, requiriendo de al menos 5 min para alcanzar el máximo, y pudo observarse que la velocidad de precipitación aumenta al incrementar el pH del medio de trabajo. Para el EuL se obtuvieron curvas de titulación sigmoideas, con un máximo de recupero del 75% y 60% para pH 4.00 y 4.50 respectivamente. La concentración necesaria para alcanzar la mitad de la actividad máxima a pH 4.00 es el doble que a pH 4.50. Para el EuS las curvas obtenidas mostraron un comportamiento hiperbólico, con un máximo de recupero de 90% y 52% para pH 4.00 y 4.50, respectivamente. En este caso la concentración de polímero necesaria para alcanzar la mitad de la actividad máxima fue la misma para las dos condiciones ensayadas, y menor que la requerida para el EuL. Se observó también que ninguno de los polímeros afecta la actividad de la proteína Conclusiones: Ambos polímeros resultaron eficientes para la precipitación de la enzima. Sin embargo se encontraron diferencias en los rendimientos y las estequiometrias de precipitación que pueden deberse a las diferencias de densidad de carga eléctrica de ambos polímeros. Los datos obtenidos fueron aplicados para la purificación de la proteína a partir del homogenado con resultados exitosos