Preparación de una membrana de afinidad a partir de celulosa bacteriana

P. CORNEJO; J. A. RODRÍGUEZ; A. PÉREZ PADILLA

San Luis

Congreso; XIX Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 2001

Las técnicas separativas por afinidad representan una metodología eficiente en la purificación de proteínas. Entre los últimos avances e innovaciones de interés en esta área se incluyen el diseño y desarrollo de membranas de afinidad. Estas consisten en una molécula ligando de afinidad acoplada directamente a la superficie de una membrana macro o microporosa; vía grupos hoxidrilo si se trata de celulosa. La muestra es filtrada a través de la membrana y la proteína blanco es retenida, en el sistema membrana- ligando, por la adsorción específica (binding) con el ligando y separada de los demás componentes. Los ligandos bioespecíficos mas utilizados en tecnología de afinidad son los pigmentos tipo triazina. Una de estas moléculas ligando, Cibacron blue, presenta adsorción específica con enzimas NAD+-dependientes debido a la semejanza en la estructura molecular de superficie entre este pigmento y los nucleótidos.             El presente trabajo describe la obtención de membranas de celulosa bacteriana mediante cultivos estáticos usando cepas de Acetobacter; y la inmovilización de la molécula ligando Cibacron blue a la membrana por reacción covalente entre grupos –CH2OH libres del polímero celulosa y el cloro del anillo monoclorotriazina del pigmento. Se diseñó un modelo experimental a escala analítica para etsudiar la adsorción específica de lisozima, la cual presenta afinidad por el ligando Cibacron. Los resultados preliminares obtenidos de adsorción de la proteína sobre la membrana celulosa bacteriana-Cibacron blue muestran una apropiada capacidad de retención a bajas velocidades de flujo de filtrado, usando como medio de adsorción Tris-HCl/NaCl 50 mM, pH 8 y como medio de elución ácido acético al 1 %.