INTERLEUQUINA 1ß PROVOCA UNA DISMINUCIÓN DE ACTIVIDAD DEL TRANSPORTADOR CANALICULAR MRP2 POR UN MECANISMO MEDIADO POR PI3K/AKT

VIRGINIA SOLEDAD SCHUCK; ROMINA BELÉN ANDERMATTEN; NADIA CIRIACI; ISMAEL RICARDO BAROSSO; ENRIQUE SÁNCHEZ POZZI

Buenos Aires

Congreso; XX Congreso Argentino de Hepatología 2019; 2019

Asociación Argentina para el Estudio de las enfermedades del hígado

IntroducciónLas citoquinas inflamatorias como TNFα e interleuquina 1ß (IL1ß) producen alteraciones en la localización y función de los transportadores canaliculares que pueden mediar la falla secretoria biliar observada en patologías con componente inflamatorio como la sepsis. La acción de las citoquinas promueve la desinserción de transportadores canaliculares poractivación de proteínas de señalización intracelular llevando al desarrollo de colestasis intrahepatocitaria. PI3K y la quinasa cascada abajo AKT han demostrado participar en cascadas de señalización que lleva a desinserción de transportadores en otros modelos de colestasis y nuestro objetivo fue evaluar si estas proteínas participan en la alteración del transportador canalicular Mrp2 mediada por IL1ß.MetodologíaEn estudios preliminares, se trataron duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) con diferentes concentraciones de IL-1ß (1, 3, 10, 30 y 100ng/ml, 20 min). Luego, se expusieron a clorometilfluoresceína diacetato (CMFDA, 2,5μM, 15 min) convertida intracelularmente en glutatión metilfluoresceína (GMF), sustrato de Mrp2. Finalmente se estimó la actividad Mrp2 por el porcentaje de DAHR que acumularon GMF en la vesícula canalicular (cVA). IL1ß produjo un efecto máximo a concentraciones de 10ng/ml, eligiéndose esa concentración para todos losestudios. Para evaluar el rol de PI3K, se preincubaron DAHR con su inhibidor Wortmannina (W 100nM, 15 min), seguido de exposición a IL1ß (20 min) y a CMFDA. Paralelamente se estimó en hepatocitos aislados tratados con IL1ß, la activación de la vía PI3K/AKT mediante la evaluación de la fosforilación de AKT por Western Blot.Análisis estadísticoLos resultados fueron expresados como la media ± error estándar. Las comparaciones múltiples se realizaron con ANOVA de una vía, seguida por el test de Newman-Keuls. Valores de p