Modulación por proteína quinasas activadas por mitógeno (MAPKs) del estrés oxidativo (EO) y la alte¬ración de la función secretora hepatocanalicular inducida por tert-butilhidroperóxido (tBOOH)

TOLEDO, FLAVIA D.; BASIGLIO, CECILIA; BOAGLIO, ANDREA; BAROSSO, ISMAEL R.; ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J; ROMA, MARCELO G.

Rosario

Congreso; Congreso de la Sociedad Argentina de Fisiología 2012; 2012

SAFIS

En estudios previos en duplas aisladas de hepatocitos de rata, demos¬tramos que el tert-butilhidroperóxido (tBOOH), un agente que provoca EO vía formación de poros de transición de permeabilidad mitocondrial, induce alteraciones en la función secretora hepatocanalicular vía inter¬nalización endocítica de transportadores canaliculares, y que las MA¬PKs del tipo ERK 1/2, JNK 1/2 y p38MAPK están involucradas en dicho efecto. En este trabajo, indagamos en el mecanismo de injuria oxidativa mediado por MAPKs, estudiando la participación de las misma en la generación de EO inducido por tBOOH. La mediación de MAPKs en la alteración secretora hepatobiliar fue además confirmada en el modelo de hígado aislado y perfundido de rata (HAPR), el cual conserva la inte¬gridad fisiológica epitelial. Para estudiar la influencia de las MAPKs en la generación de EO inducido por tBOOH, se trataron hepatocitos de rata en cultivo primario con tBOOH (100 μM) durante 15 min, preincubados (o no) durante 15 min con inhibidores específicos de MAPKs del tipo ERK 1/2 (PD098059 –PD–, 5mM), JNK 1/2 (SP600125 –SP–, 1μM) o p38MAPK (SB203580 –SB–, 1μM). El EO se evaluó midiendo la a)lipoperoxidación de membranas (LPO), mediante la formación de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico y b) la formación intracelular de especies reactivas del oxígeno (ROS), utilizando el fluoróforo redox 2´,7´-diclorofluoresceí¬na. Todos los inhibidores de MAPKs previnieron significativamente la LPO y la formación de ROS inducidas por tBOOH. En el modelo de HAPR, la perfusión con tBOOH (75 μM, 10 min) redujo significativamente el flu¬jo biliar (-73±13%, p