MODULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DEL TRANSPORTADOR MRP2 POR TNF-α: ROL DE LAS PROTEÍNAS PI3K Y ERK1/2.

CIRIACI, N; BAROSSO I.R.; ANDERMATTEN, R B; MAIDAGÁN, P M; RUIZ, M LAURA; SÁNCHEZ POZZI E.J.

Mar del Plata

Congreso; LX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015

TNF-α junto con IL-1ß e IL-6 media la disminución de la actividad deltransportador canalicular Mrp2 producida por lipopolisacárido. Sedesconocen las vías de señalización por las que TNF-α altera lafunción del transportador, pero se sabe que esta citoquina activa PI3Ky la MAP quinasa ERK1/2. Objetivo: Evaluar si PI3K y ERK1/2participan en la alteración del transporte de Mrp2 mediada por TNF-αy si están ubicadas secuencialmente o en vías de señalizacióndistintas. Metodología: Duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR)se incubaron con TNF-α (6,25pg/ml, 20 min) en presencia del inhibidorde PI3K, Wortmanina (W 100nM); el inhibidor de MEK1/2, PD980589(PD 5μM, cascada arriba de ERK1/2), y ambos inhibidores ensimultáneo. Finalmente, se expusieron a clorometilfluoresceínadiacetato (2,5μM) cuyo metabolito, glutatión metilfluoresceína (GMF),es sustrato de Mrp2. Por microscopía de fluorescencia se determinóel porcentaje de DAHR que acumularon GMF en la vesículacanalicular (cVA). En hepatocitos aislados tratados con TNF-α seanalizó la activación por fosforilación de las proteínas ERK1/2 y AKT(cascada abajo de PI3K) mediante Western Blot. Resultados: (% delcontrol±EE, n:3-10) TNF-α redujo cVA-GMF (66±3a), mientras que lainhibición de PI3K y MEK1/2 previno la disminución por TNF-α: TNF-α+W (86±4a,b) y TNF-α+PD (84±2a,b). La coinhibición PI3K y MEK1/2produjo sumación de efectos: TNF-α+W+PD (97±8b,c). El tratamientocon TNF-α provocó un aumento máximo de los niveles fosforilados deAKT (364±64a) y ERK1/2 (223±50a) a los 20min. Estos efectos fueronprevenidos por el agregado de los inhibidores cascada arriba: W (AKT:112±2b) y PD (ERK1/2 63±32b). a vs control, b vs TNF-α, c vs TNF-α+W o TNF-α+PD, p