Participación de la vía adenilato ciclasa-PKA y su vinculación con PI3K en la alteración del transportador Mrp2 inducida por taurolitocolato

ANDERMATTEN, R B; CIRIACI, N; RAZORI, V; BAROSSO I.R.; SÁNCHEZ POZZI E.J.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

En condiciones colestásicas, transportadores como Mrp2 abandonan la membrana canalicular sufriendo internalización endocítica. La sal biliar taurolitocolato (TLC) promueve esta desinserción por activación de proteínas de señalización intracelular como PI3K. Últimamente, se ha descrito que adenilato ciclasa (AC) y PKA están implicadas en el modelo de colestasis por estrógenos. Dado que TLC puede aumentar AMPc, planteamos evaluar la participación de la vía AC-PKA en la colestasis inducida por TLC y su relación con la proteína PI3K.METODOLOGÍA: Duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) fueron expuestas a TLC (2,5μM) durante 20 min, previa incubación con MDL12330 (MDL, 20μM), KT5720 (KT, 0,25μM) y Wortmanina (WM, 100nM), inhibidores de AC, PKA y PI3K respectivamente. Luego, se expusieron a clorometilfluoresceína diacetato (2,5μM), convertido intracelularmente en glutatión metilfluoresceína (GMF), sustrato de Mrp2. Se analizó por microscopía de fluorescencia la proporción de DAHR capaces de acumular GMF en sus vesículas canaliculares (cVa). Se estudió la interacción entre las vías, evaluando sumación de las acciones protectoras de WM, MDL y KT.RESULTADOS: (% del control±EE;n:2-8) En DAHR tratadas con TLC el porcentaje de GMF acumulado en vesículas canaliculares disminuyó significativamente (57±5a). Al pre-incubar con los inhibidores se revirtió parcialmente la acción de TLC: TLC+WM (77±7a,b), TLC+MDL (80±9a,b) y TLC+KT (74±10a,b). No se observó sumación de efectos de los inhibidores evaluados TLC+KT+WM (79±12a,b) y TLC+MDL+WM (85±4a,b). a diferente de control, b diferente de TLC. P