INVESTIGADORES
BAROSSO Ismael Ricardo
congresos y reuniones científicas
Título:
CULTIVOS PRIMARIOS DE HEPATOCITOS EN ?SÁNDWICH DE COLÁGENO? (CPHS): UN NUEVO MODELO ``IN VITRO`` PARA EL ESTUDIO DE ALTERACIONES DE TRANSPORTE CANALICULAR INDUCIDAS POR AGENTES COLESTÁSICOS
Autor/es:
MISZCZUK, GISEL S.; BAROSSO, ISMAEL R.; ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; BOAGLIO, ANDREA; PELLEGRINO, JOSE; SÁNCHEZ POZZI, ENRIQUE J; ROMA, MARCELO G.; CROCENZI, FERNANDO A.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013
Institución organizadora:
SAIC, SAFIS, SAFE
Resumen:
Los modelos celulares polarizados para el estudio de las alteraciones
de transportadores canaliculares en colestasis, como las
duplas aisladas de hepatocitos, poseen bajo rendimiento celular
y corta vida útil (6-7 hs). Los CPHS forman una red de pseudocanalículos
que conservan durante varias semanas su capacidad
funcional y metabólica. Se evaluó su utilidad para estudiar alteraciones
funcionales del transportador canalicular Mrp2 inducidas
por los agentes colestásicos modelo estradiol 17ß-D-glucurónido
(E17G) y taurolitocolato (TLC). Hepatocitos aislados con colagenasa
fueron sembrados en placas de 6 pocillos recubiertas con 100 µl de
colágeno gelificado (3 mL/pocillo, 4,5 x105 cél/mL) con medio DMEM
adicionado con suero fetal bovino, antibióticos, dexametasona,
insulina y glucosa. A las 24 hs, se agregó una segunda capa de
colágeno, renovándose el medio. Al día 3, se expusieron los CPHS
a E17G (25-200 µM) o TLC (1-2,5 µM) por 30 min sobre una platina
termostatizada en un microscopio de epifluorescencia. Finalmente,
se agregó cloro-metilfluoresceína-diacetato (2,5 μM), precursor del
sustrato fluorescente de Mrp2 glutatión-metilfluoresceína, tomándose
fotografías digitales cada min, por 10 min. Se seleccionaron
70-100 pseudocanalículos y se midió la intensidad promedio de
fluorescencia, graficándose la misma vs. tiempo y ajustándose
los datos por regresión lineal (pendiente = ?velocidad inicial de
transporte? - VIT). E17G y TLC disminuyeron VIT en forma concentración-
dependiente (Control=22,6±1,2; E17G: 25 µM=19,2±2,3;
50 µM=15,1±1,3; 100 µM= 14,1±0,2*; 200 µM=12,3±1,1*; TLC: 1
µM=19,2±1,8; 1,5 µM=13,0±1*; 2 µM=11,5±0,3*; 2,5 µM=6,7±1,3*;
*p
