INVESTIGADORES
BAROSSO Ismael Ricardo
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTRADIOL 17ß-D-GLUCURÓNIDO (E17G) INDUCE ENDOCITOSIS DE BSEP Y MRP2 DEPENDIENTE DE CLATRINA EN DUPLAS AISLADAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHR)
Autor/es:
MISZCZUK, GISEL S.; BOAGLIO, ANDREA; BAROSSO, ISMAEL R.; LAROCCA, M. CECILIA; ROMA, MARCELO G.; CROCENZI, FERNANDO A.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014
Institución organizadora:
SAIC-SAI
Resumen:
Previamente, demostramos que los transportadores canaliculares
Bsep y Mrp2, ambos esenciales para la formación de
bilis, sufren internalización endocítica en diferentes modelos
de colestasis, tal como la inducida por E17G, siendo este fenómeno
responsable de la falla secretora biliar. Se desconoce el
mecanismo por el cual E17G induce dicha endocitosis, siendo
su dilucidación el objetivo de este trabajo. Métodos: Las DAHR
se obtuvieron por el método de doble perfusión de hígados con
colagenasa, se enriquecieron por elutriación, se cultivaron 4,5
hs. en placas cubiertas con colágeno (37ºC, 2x104 cél/mL) en
medio L15 y, finalmente, se expusieron a E17G 200 μM durante
20 min, o a su vehículo (DMSO; grupo control). Se realizaron
pre-tratamientos de 15 min para inhibir la endocitosis dependiente
de clatrina con i) monodansil-cadaverina (MDC) 100 μM o ii)
depleción de K+ (-K+), así como la endocitosis dependiente de
caveolina con filipina (F) 1μg/mL. La actividad de Bsep y Mrp2 se
evaluó determinando, por análisis de imágenes, el% de DAHR (>
200) que exhibieron acumulación vacuolar canalicular (AVc) de
los sustratos fluorescentes CGamF (Bsep) y GS-MF (Mrp2) por
microscopía de fluorescencia, luego de ser incubadas durante 15
min con 0,3 μM CGamF o con 2,5 μM CMFDA (precursor de GSMF).
Resultados: E17G disminuyó, respecto del control (100%),
la AVc de CGamF y GS-MF (45,8±7,5% y 48,7±8,6%, respectivamente,
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