En la Colestasis por Estradiol-17beta-glucurónido(E17G) en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR) la participación del Receptor de Estrógeno (RE) es posterior a la activación de PKCalfa(PKC)

BAROSSO, ISMAEL R.; ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; TABORDA, DIEGO; CROCENZI, FERNANDO A.; SANCHEZ POZZI, ENRIQUE

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión Científica Anual 2010 (SAFIS), XLII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2010

SAIC

La activación del RE es necesaria para ciertos efectos del estradiol tales como la activación de quinasas de señalización: PKC y PI3K. Previamente demostramos que ambas quinasas participan en la colestasis por E17G, su derivado glucuronizado, por lo que se evaluó el rol del RE en esta patología. La activación del RE se manifiesta por su fosforilación en ser118 y puede ser bloqueada por ICI182,780 (ICI).Métodos: Estudios funcionales: DAHR fueron tratadas con dosis crecientes de E17G (25-800 µM) en presencia de ICI (1µM) y luego expuestas a clorometilfluoresceína diacetato un compuesto lipofílico captado por difusión pasiva y convertido en glutation metilfluoresceína (GSMF), sustrato de Mrp2. Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon GSMF en la vacuola canalicular. Se evaluó además el efecto conjunto de ICI y Gö6976 (1µM), inhibidor de PKC sobre el efecto de E17G (100µM) en la acumulación vacuolar de GSMF.Resultados(n=3): Las curvas dosis-respuestas mostraron que ICI aumentó CE50 de E17G (86±4μM vs 317±24μM, p<0.05). ICI y Gö6976 protegieron sin sumar sus efectos (E17G:66±6%, E17G+ICI:87±4%, E17G+Gö:89±2%, E17G+ICI+Gö:84±7%, p<0.05) sugiriendo que comparten una misma vía de señalización. Para establecer un orden de activación se evaluó la activación del RE inducida por E17G (100µM) en presencia de Gö6976 (estimada por Western blot [WB] del RE fosforilado relativizado al RE total) y la activación de PKC por E17G (100µM) en presencia de ICI (evaluada por translocación de PKC a membrana estimada por WB). Se observó que ICI no previno la activación de PKC inducida por E17G, en cambio, Gö6976 previno la activación de RE inducida por E17G (%Control= E17G:176±3%, E17G+Gö:88±12%, p<0.05, n=3).Conclusiones: El bloqueo de la activación del RE previene la alteración funcional del transportador Mrp2 producida por E17G. El RE compartiría la vía de señalización con PKC, siendo la activación de la quinasa previa a la activación de RE.