Rol de EPAC (exchange protein activated by Camp) en la protección por salbutamol (S, agonista adrenérgico a2) de la colestasis por estradiol-17beta-glucurónido (E) en duplas aisladas de hepatocitos de rata(DAHR).

ZUCCHETTI, ANDRÉS E.; BAROSSO, ISMAEL R.; OCHOA, ELENA J.; CROCENZI, FERNANDO A.; SANCHEZ POZZI, ENRIQUE

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión Científica Anual 2010 Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS), XLII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2010

SAIC

Vimos previamente que S modula el AMPc hepático y así previene de la colestasis por E de forma independiente de PKA y dependiente de microtúbulos (mt). Una vía de acción de AMPc independiente de PKA es vía Epac. En DAHR, se evaluó la prevención por Epac de la alteración funcional por E en los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2. También se comparó su acción preventiva con S y con glucagon (G, dependiente de PKA, independiente de mt).Se obtuvieron DAHR de ratas Wistar hembra adultas por perfusión con colagenasa y elutriación. Luego de 5h de cultivo se trataron con un agonista Epac (8-CPT-AMPc, 50 µM, 15 min) y se co-trataron con S 10µM o G 1µM. Un grupo de preparaciones se pretrató 30 min con el inhibidor de mt colchicina (Col 1µM). Luego se incubó cada grupo experimental 20 min con E (50µM) o solvente. Finalmente, se expusieron 15 min a colil lisil fluoresceína (CLF 2µM, sustrato de Bsep) o clorometil fluoresceína diacetato (CMFDA 2,5 µM, cuyo metabolito, GMF, es sustrato de Mrp2). Por microscopía de fluorescencia se determinó el porcentaje de DAHR que acumularon CLF (cvaCLF) o GMF (cvaGMF).Resultados (media±SD): E redujo la cvaCLF y cvaGMF. Epac previno la reducción causada por E. Col inhibió la acción de Epac. Al contrario de G, S en conjunto con Epac no tuvo efectos aditivos (p<0.05, n=3)%CVA    Control    E    E-Epac    E-S    E-Epac-S    E-G    E-G-Epac    E-Col    E-Col-EpacCLF    100+0    49+6a    78+9b    77+6b    74+9b    74+3b    92+7c    63+1a    64+3aGMF    100+0    61+2a    94+3b     80+4b     88+5b    81+4b    106+2c    65+5a    72+3aa difiere significativamente de control.b difiere significativamente de control y de E.c difiere significativamente de E, E-G, E-Epac.Conclusión: al igual que S, Epac protege parcialmente de la alteración funcional por E por un mecanismo dependiente de mt. A su vez, sus acciones conjuntas no muestran un efecto aditivo. Esto sugeriría que S protege activando la vía Epac.