Mecanismos de modulación de la actividad del intercambiador Na+/Ca2+ (NCX) por calcitriol en intestino de pollo.

V. CENTENO, G. PICOTTO, A. PÉREZ Y N. TOLOSA DE TALAMONI.

cordoba

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad de Endocrinología de Córdoba.; 2007

SEMCO

El 1,25(OH)2D3 (calcitriol) regula la función de los enterocitos mediante incremento del transporte transcelular de Ca2+ por un mecanismo genómico que involucra transcripción de genes específicos que codifican para proteínas transportadoras y/o un mecanismo no genómico, que involucra respuestas rápidas de modulación de segundos mensajeros intracelulares que podrían afectar el transporte del catión. El calcitriol afecta distintas etapas del transporte transcelular de Ca2+. La salida del catión hacia la lámina propia a través de la membrana basolateral (MBL) se efectúa por medio de la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática y del intercambiador Na+/Ca2+ (NCX). La Ca2+-ATPasa constituye el mecanismo principal de la salida del catión, pero el intercambiador posee mayor capacidad de transporte, sólo que con menor afinidad. Si bien la actividad del NCX en el intestino constituye el 30% del mecanismo de salida de calcio, poco es lo que se conoce sobre su regulación a nivel intestinal. Por lo tanto, nuestro objetivo fue establecer los mecanismos de modulación del 1,25(OH)2D3 sobre la expresión y la actividad del NCX de células epiteliales intestinales. Pollos controles y raquíticos fueron tratados con calcitriol y luego se aislaron las células intestinales. En algunos experimentos las células aisladas fueron expuestas a 1,25(OH)2D3 y/o moduladores de las vías de segundos mensajeros intracelulares. Se midió la actividad NCX del intercambiador trabajando en modo reverso, como la diferencia entre la captación de Ca2+ en presencia y ausencia de Na+ en la mezcla de incubación. Los cambios inducidos por la hormona en los niveles de ARNm para el NCX se midieron por RT-PCR. Se utilizó ANOVA a una vía y test de Duncan para hacer las comparaciones múltiples de medias. En algunos experimentos se utilizó test ?t?de Student. Las diferencias se consideraron significativas a P< 0,05. La actividad basal del NCX resultó menor en los enterocitos de animales raquíticos. La administración crónica de 50 UI de vitamina D/día durante 10 días o de 1 μg de calcitriol después de 12 horas incrementó la actividad NCX. La exposición directa de las células intestinales aisladas al calcitriol también aumentó la actividad del intercambiador, efecto que pudo ser bloqueado por el tratamiento previo con cicloheximida, lo cual demostró que la síntesis de proteínas es parte del efecto hormonal. Tanto la vitamina D como el calcitriol estimularon los niveles de ARNm para NCX, resultado que sugiere que la hormona promueve la transcripción del gen NCX1 o la estabilización del transcripto. La exposición a tiempos cortos (3 a 15 min) de las células al calcitriol (10-8M) resultó en una rápida inducción de la actividad de NCX, siendo máxima a los 5 minutos de tratamiento. El activador directo de adenilil-ciclasa forskolina (10 µM), estimuló la actividad del intercambiador, lo que sugiere que proteina quinasa A podría ser uno de los mediadores de la cascada de señalización utilizada por el calcitriol. La preincubación de las muestras tanto con el inhibidor específico de PKA (Rp-cAMPS, 150 µM) como con el de PKC (Staurosporina, 10-8M) bloqueó el incremento en la actividad NCX inducido por calcitriol. Los resultados sugieren que el calcitriol estimula la actividad del intercambiador Na+/Ca2+ de intestino a través de mecanismos de tipo genómico mediante estímulo de la transcripción y no genómico rápido induciendo las vías de proteínas quinasas A y C.