Calcitriol regula la actividad del intercambiador Na+/Ca2+ (NCX) intestinal mediante mecanismos genómico y no genómico

V. CENTENO, G. PICOTTO, A. PÉREZ Y N. TOLOSA DE TALAMONI.

Chile

Congreso; VII Reunión de la Sociedad Iberoamericana de Osteología y Metabolismo Mineral; 2007

En el intestino, el 1,25(OH)2D3 (calcitriol) regula la absorción de calcio de manera dependiente e independiente de la regulación génica (no-genómico). La actividad del NCX no es despreciable en el intestino como se pensaba, ya que constituye el 30% del mecanismo de salida de calcio hacia la lámina propia (1). Sin embargo, es muy poco lo que se conoce sobre los mecanismos moleculares por los que el calcitriol regula al intercambiador a nivel intestinal. Nuestro objetivo fue establecer los mecanismos de modulación del 1,25(OH)2D3 sobre la expresión y la actividad del NCX de células epiteliales intestinales. Animales controles y raquíticos fueron tratados con calcitriol y luego se aislaron las células intestinales (1). En algunos experimentos se utilizaron pollos normales alimentados con una dieta de bajo calcio y en otros, las células aisladas fueron expuestas a 1,25(OH)2D3 y/o moduladores de las vías de segundos mensajeros intracelulares. Se midió la actividad NCX del intercambiador trabajando en modo reverso, como la diferencia entre la captación de Ca2+ en presencia y ausencia de Na+ en la mezcla de incubación (1). Los cambios inducidos por la hormona en los niveles de ARNm para el NCX se midieron por RT-PCR y su expresión, Western blot. La actividad del NCX resultó menor en los enterocitos provenientes de animales raquíticos vs controles normales. Tanto el tratamiento de los animales con calcitriol como las dietas con bajo contenido de calcio incrementaron la actividad NCX. La exposición directa de las células intestinales aisladas al calcitriol también aumentó la actividad del intercambiador, efecto que pudo ser bloqueado por el tratamiento previo con cicloheximida, lo que demostró que la síntesis de novo de proteínas es parte del efecto hormonal. Anexar resultados RT-PCR. La exposición a tiempos cortos (3 a 15 min) de las células al calcitriol (10-8M) resultó en una rápida inducción de la actividad de NCX, siendo máxima a los 5 minutos de tratamiento. El activador directo de adenilil-ciclasa (AC), forskolina (10 µM), estimuló la actividad del intercambiador, lo que sugiere que PKA podría ser un mediador de la cascada de señalización utilizada por el calcitriol. La preincubación de las muestras con el inhibidor específico de esta enzima, Rp-cAMPS (150 µM) bloqueó el incremento en la actividad NCX inducido por calcitriol. En resumen, estos resultados sugieren que el calcitriol estimula la actividad del intercambiador a través de un mecanismo genómico y además no-genómico, en el que participa la vía dependiente de AC. (1) Comp. Biochem.and Physiol.[A], 139: 133 (2004)