Efectos antitumorales del calcitriol y DL-butionina-S,R-sulfoximina en celulas intestinales neoplasicas.

. LIAUDAT AC, BOHL LP, TOLOSA DE TALAMONI NG, PICOTTO G

cordoba

Jornada; Jornadas de Investigacion Cientifica, Cs. Medicas, UNC; 2011

La incidencia y el pronostico del cancer de colon estan en estrecha relacion con los niveles plasmaticos de 25(OH)D3 metabolito indicador del estado nutricional de vitamina D. Por otro lado, la inclusion de drogas que deplecionan glutation (GSH) tales como D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumentan la sensibilidad de las celulas neoplasicas a los tratamientos. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferacion de las celulas de cancer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Para ello, las celulas Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM),BSO (2-500 nM), con ambas drogas o su vehiculo a distintos tiempos de exposicion. La proliferacion celular se determino por la tecnica de cristal violeta. La actividad de las enzimas del sistema antioxidante superoxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT), como asi tambien la enzima marcadora de diferenciacion celular fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutation (GSH) se midieron por espectrofotometria. La apoptosis se evaluo por la tecnica de electroforesis de ADN en gel de agarosa, el estudio de la externalizacion de fosfatidil serina y de la actividad de caspasa 3. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometria de flujo. Los resultados se analizaron estadisticamente mediante el test de ANOVA a una via seguido del test de Bonferroni como post-hoc. Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron el crecimiento de las c¨¦lulas Caco-2, efecto que result¨® dependiente del tiempo y de la concentraci¨®n de droga utilizada. El contenido total de GSH disminuy¨® a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs tanto la actividad de CAT como el potencial de membrana mitocondrial aumentaron solo con el tratamiento combinado y la actividad SOD no se modifico. La actividad de FAL aumento en las celulas tratadas con 1,25(OH)2D3 y con ambas drogas. El ciclo celular no se altero. La evaluacion del proceso apoptotico a traves de las tres tecnicas resulto negativo. En conclusion, BSO incrementa el efecto antiproliferativo del calcitriol sobre las celulas Caco-2 mediante aumento del estres oxidativo, el cual puede ser solo parcialmente compensado por el sistema enzimitico antioxidante. La muerte celular por apoptosis no estaria involucrada. El incremento de FAL sugiere una induccion de la diferenciacion celular debida al calcitriol.