Efectos antineoplasicos del calcitriol y DL-butionina-S,R-sulfoximina en celulas Caco-2.

LIAUDAT A, BOHL L, TOLOSA DE TALAMONI N, MALETTO B, PISTORESSI M, PICOTTO G

Mar del Plata

Congreso; Reunion Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC); 2011

El calcitriol ha sido reconocido como un potente agente antiproliferativo y promotor de diferenciaci¨®n celular. Por otro lado, se ha demostrado que D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumenta la sensibilidad de las c¨¦lulas neopl¨¢sicas a los tratamientos. El objetivo del trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferaci¨®n de las c¨¦lulas de c¨¢ncer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Las c¨¦lulas Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM),  BSO (2-500 ¦ÌM) o con ambas drogas o su veh¨ªculo a diferentes tiempos. La proliferaci¨®n celular se determin¨® por la t¨¦cnica de violeta de cristal. La actividad de las enzimas super¨®xido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutati¨®n (GSH) se midieron por espectrofotometr¨ªa. La externalizaci¨®n de fosfatidil serina, el potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometr¨ªa de flujo. La actividad de caspasa 3 se midi¨® por ELISA. El an¨¢lisis estad¨ªstico se realiz¨® por ANOVA/Bonferroni. Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron la proliferaci¨®n de las c¨¦lulas Caco-2. El contenido total de GSH disminuy¨® a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs la actividad de CAT y el potencial de membrana mitocondrial aumentaron s¨®lo con el tratamiento combinado mientras que la actividad de SOD no se modific¨®. La actividad de FAL aument¨® en las c¨¦lulas tratadas con calcitriol  y con ambas drogas a las 96 hs. El ciclo celular no se alter¨® y no se registraron cambios en los par¨¢metros evaluados para la apoptosis. En conclusi¨®n, BSO incrementa el efecto antiproliferativo del calcitriol sobre las c¨¦lulas Caco-2 mediante aumento del estr¨¦s oxidativo. La muerte celular por apoptosis no estar¨ªa involucrada. El incremento de FAL sugiere una inducci¨®n de la diferenciaci¨®n celular.