EFECTOS SOBRE LA MIENIZACIÓN ¨IN VIVO¨ DEBIDOS A LA DISMINUCIÓN EN LA ACTIVIDAD DEL PROTEASOMA

MOIOLA C, MILLET V, SOTO E, PASQUINI J, PASQUINI LA

Vaquerias, Córdoba.Argentina

Congreso; VII Taller de Neurociencias.; 2005

Taller de Neurociencias

Nuestro laboratorio ha demostrado que la disminución en la actividad del proteasoma en cultivos primarios de oligodendrocitos (OLGc) produce aumento en su viabilidad, retiro del ciclo celular y su diferenciación precoz (Pasquini y col., 2003). Además nuestros resultados recientes demuestran que la disminución en la actividad del proteasoma lleva a la activación del promotor de MBP en una línea oligodendroglial N20.1 a través de la estabilización de Sp1 y p27 (Calatayud y col, enviado). Teniendo en cuenta los resultados obtenidos decidimos evaluar in vivo las consecuencias debido a una disminución en la actividad del proteasoma durante la mielinización. Para ello ratones Swiss machos al día 5 postnatal fueron anestesiados con Ketamina-Xilacina (75-10 mg/kg peso) e intracranealmente inyectados con distintas dosis de lactacistina en cuerpo calloso, tomando el bregma como el origen de coordenadas, a 0.78 mm caudal y 0.5 mm de la línea media y a una profundidad de 2 mm con un volumen de 3 ml. Esta inyección fue repetida al día 7. Al día 15 los animales fueron anestesiados y perfundidos, disecados los cerebros y tratados convenientemente para determinaciones inmunohistoquímicas o parámetros bioquímicos de mielinización y determinación de las actividades del proteasoma. Nuestros resultados muestran una buena correlación entre la dosis de lactacistina utilizada y la inhibición en las actividades del proteasoma obtenida. Además observamos en los animales inyectados con lactacistina un aumento en las proteínas de la mielina purificada, un aumento significativo (p<0.001) de los galactolípidos o cerebrosidos característicos de la mielina, un aumento significativo en los niveles de expresión de las diferentes isoformas de MBP evaluadas por Western Blot, una tinción aumentada de O1 evaluada por inmunohistoquímica, una disminución en los niveles de mRNA de Sp1 y aumento en las diferentes isoformas del mRNA de MBP evaluadas por semiquantitativa RT-PCR. Además encontramos aumentados los niveles de expresión de receptor de PDGFa y disminuidos los de GFAP. En un estudio complementario hecho en cultivos primarios de OLGcs observamos que la lactacistina estabiliza las señales de proliferación de PDGF+bFGF evaluadas por citometría de flujo donde se obtiene una aumento significativo de las células en fase S. Estos resultados demuestran cierta analogía con los efectos sobre la diferenciación oligodendroglial por la disminución en la actividad del proteasoma in vitro e in vivo, y además nos aportan información sobre el efecto de lactacistina sobre la proliferación de los precursores de OLGcs (células PDGFreceptor-a positivas) lo cual resulta de gran significancia para el estudio y tratamiento de diversas patologías desmielinizantes como la Esclerosis Múltiple.