33. El proteasoma participa en la activación del promotor de MBP a través de la regulación de la vida media de factores de transcripción

C CALATAYUD, JM. PASQUINI, EF SOTO, LA PASQUINI

La Falda, Córdoba

Taller; Taller de Neurociencias; 2007

Taller de Neurociencias

Nuestro laboratorio ha demostrado que el tratamiento de células oligodendrogliales en cultivo (OLGcs) con bajas concentraciones de lactacistina (L), un inhibidor específico del proteasoma 26S, lleva a su retiro precoz del ciclo celular y a su diferenciación evaluada por cambios bioquímicos y morfológicos.  Un constituyente importante de la mielina son las proteínas básicas de mielina (MBPs). La regulación de este gen tiene lugar a diferentes niveles, particularmente al inicio de la transcripción. El promotor de la MBP contiene numerosos sitios de unión a diferentes factores de transcripción, entre ellos Sp1, cuyo nivel de expresión es regulado por el sistema Ub-P. Usando una línea inmortalizada de OLGcs (N20.1) transfectadas transientemente con el promotor de MBP unido al gen reportero de b-gal, observamos en presencia de L y otro inhibidor del proteasoma (MG132, M), un aumento en la activación de dicho promotor y de los niveles de las proteínas p27Kip1 y Sp1, además de una mayor unión de este último a su secuencia de DNA. Para definir la región del promotor de MBP respondedora a la inhibición del proteasoma utilizamos una línea oligodendroglial (CG4) y cultivos primarios de OLGcs transfectadas transientemente con diferentes fragmentos del promotor. Los resultados obtenidos sugieren que la región de Sp1 está involucrada en el aumento en la actividad observada con L. En cultivos primarios de OLGcs transfectados similarmente, observamos una disminución en la actividad del promotor en todos los casos y en presencia de L. Este efecto no ocurrió cuando la porción del promotor respondedora a Sp1 fue mutada. No se observaron cambios en presencia de M. En relación a la expresión de las proteínas Sp1 y MBP, observamos un aumento en MBP solo en presencia de M en OLGcs. En CG4 se observó un aumento en la expresión de Sp1 sólo en presencia de L. Es posible que en OLGcs, Sp1 compita por la unión a esta región con un inhibidor (Nkx2.2), probablemente ausente en CG4. Nkx2.2 podría ser también sustrato del proteasoma.