Caracterizaciòn del perfil inflamatorio de la rata senil con deficit cognitivo: La microglía que sobreexpresa TYROBP como modelo de estudio.

ARIZA S; PARDO J; REGGIANI PC; MOREL GR

La Plata

Jornada; Jornadas de Medicina 2018; 2018

Facultad de Ciencias Médicas

INTRODUCCIÓN: La edad es el componente etiológico más importante en el desarrollo de las enfermedades neurodegenerativas. En nuestro laboratorio hemos caracterizado a la rata Sprague Dawley (SD) hembra senil de 29-32 meses como modelo de envejecimiento cerebral y déficit cognitivo. La Enfermedad de Alzheimer (EA), cuyo principal factor de riesgo es el envejecimiento, está marcada por eventos neuroinflamatorios que involucran a la glía, incluidos los astrocitosy, en particular, la microglía. Nuestro objetivo general es dilucidar los mecanismos celulares y moleculares de la neurodegeneración tanto en el envejecimiento normal como en la EA.OBJETIVOS:1- Caracterizar el envejecimiento cerebral desde el punto de vista del déficit cognitivo y la neuroinflamación del hipocampo.2- Estudiar el transcriptoma diferencial asociado al envejecimiento del hipocampo, una región cerebral clave en la formación y retención de la memoria, e identificar genes proinflamatorios sobreexpresados en la microglia senil.3- Establecer un modelo celular de neuroinflamación en células microgliales.Lentivirus Iba1 GFP DAPI MergeLV-T2A-GFPLV-TYROBP-T2A-GFPLV-GFPLV-TYROBP-GFPObj.1: Se utilizaron ratas viejas de 28 meses de edad versus jóvenes de 4 meses. Para estudiar el déficit cognitivo en el envejecimiento se evaluó la memoria espacial en el Laberinto Barnes (LB). Para estudiar la neuroinflamación en el hipocampo se realizó un estudio microscópico de la población microglial, mediante inmunohistoquímica contra Iba1 (ionized calcium-binding adapter molecule 1).Obj.2: Para estudiar la transcriptómica diferencial se realizó el secuenciamiento de ARN de hipocampo derecho de ratas jóvenes y viejas. Obj. 3: Para obtener el modelo celular de neuroinflamación construimos dos lentivirus (LV): un bicistrónico que sobreexpresa simultaneamente Tyrobp y la proteina fluorescente verde (GFP) y, otro, que sobreexpresa la proteina quimera Tyrobp-GFP; como control se construyó un LV que codifica sólo para GFP. Las células de microglía de ratón BV2 fueron transducidas con los LV mencionados anteriormente y estudiadas por microscopìa de fluorescencia.El envejecimiento en la rata SD está marcado por una pérdida de capacidad de aprendizaje y memoria espacial, que correlaciona a nivel hipocampal con un aumento de la reactividad microglial. Esto se corresponde con un aumento de genes proinflamatorios, entre ellos el gen de la proteína Tyrobp. Futuros estudios en las líneas celulares BV2 generadas en este trabajo permitirán dilucidar el impacto de Tyrobp en las células microgliales asociado al envejecimiento cerebral y a las enfermedades neurodegenerativas.