Perfiles de expresión de los genes para β-galactosidasa y green fluorescent protein transferidos mediante vectores Adenovirales en el encéfalo de rata

MOREL GR, ZUCCOLILLI GO, PORTIANSKY EL, GOYA RG

Mar del plata

Congreso; Congreso conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de investigación clínica, sociedad argentina de farmacología exp., sociedad argentina de inmunología, sociedad argentina de biologia, sociedad argentina de biofisica, sociedad argentina de neuroquímica, sociedad argentina de fisiología

Dos aspectos importantes en la transferencia génica con fines terapeuticos son los niveles de expresión del transgen y la duracion de la expresion del mismo. Con el objetivo de aplicar terapia génica en modelos animales de neurodegeneración dopaminérgica senil, se evaluó la efectividad de dos vectores Adenovirales: 1) Ad.nls.beta-gal, portador del gen de la beta-galactosidasa (beta-gal) de E. coli; 2) RAd(GFP-TK)fus, portador de un gen para una proteína de fusión entre la green fluorescent protein  (GFP) y la timidina kinasa herpética (TK). Se estudiaron los perfiles de expresión in vivo de estos transgenes en sustancia nigra (SN) e hipotálamo (H), así como la expresión de largo plazo de los mismos. Los vectores fueron inoculados estereotáxicamente (1010 pfu/ml), sacrificando los animales a diferentes días posinyección (pi). Secciones coronales de 40 µm fueron analizadas morfométricamente. A los 2 días pi la distribución rostro-caudal (r-c) de la beta-gal (método de la X-gal) expresado como superficie tisular relativa (str), y como frecuencia celular relativa (fcr) mostraron una forma acampanada con su máximo en la sección de ingreso de la inyección viral (sección #0). Además, en SN la extensión en el eje r-c y el nivel de expresión de beta-gal en la sección #0 fue mayor que en H, (tabla). En SN, la expresión de largo plazo de la beta-gal mantiene su nivel durante 22 días a partir del cual comienza a disminuir. Por otro lado, el estudio cualitativo de los niveles de expresión de largo plazo de GFP en SN e H mostró que los mismos se mantuvieron sin cambios durante 30 días. Se concluye que estos vectores exhiben una expresión sostenida de sus transgenes por un lapso mínimo de 3 ó 4 semanas resultando, por lo tanto, útiles para su empleo en protocolos terapéuticos experimentales de mediano plazo en SN e H.