Inactivación fotodinámica de Aspergillus flavus mediante zinc(II) selenio-ftalocianinas

EZQUERRA RIEGA SD; LANTAÑO B; TOSCANINI MA; CUESTAS ML; GARCIA VIOR MC

Congreso; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos (IV GRAFOB).; 2018

En las últimas décadas, las infecciones fúngicas invasoras (IFI) se han incrementado significativamente debido a un aumento en el número de pacientes inmunocomprometidos como aquellos con HIV/sida, trasplante de órganos sólidos (SOT), cáncer y pacientes que reciben terapias inmunosupresoras para otras afecciones subyacentes. Junto con esta mayor incidencia, también se ha informado un cambio en los patógenos fúngicos causantes [1]. Por ejemplo, Aspergillus y Candida spp. son los organismos aislados con mayor frecuencia de pacientes con IFI. En los últimos años, se ha documentado un incremento de casos debido a Aspergillus no fumigatus, como por ejemplo, Aspergillus flavus. [2]. Además, la resistencia a los antifúngicos constituye un importante problema de salud públicaque aumenta la morbilidad y la mortalidad en pacientes con IFI y por ello urge diseñar nuevas estrategias terapéuticas para el manejo óptimo de esta condición emergente con una tasa de mortalidad cercana al 100% sin tratamiento e incluso puede alcanzar el 50% aun con tratamiento adecuado en el caso de la aspergilosis invasora.La terapia fotodinámica es una alternativa a los tratamientos convencionales, basado en la utilización de fotosensibilizadores (PS) que inhiben o matan selectivamente a las células microbianas bajo el efecto de la luz al producir especies reactivas de oxígeno (ROS), proceso conocido como inactivación fotodinámica (IFD). De acuerdo a ello en nuestro laboratorio se han sintetizado dos nuevas ftalocianinas de zinc(II) portadoras de selenio, 2,9(10),16(17),23(24)-tetrakis[4-(bencilselanil)]ftalocianinato de zinc(II) (PcSe1) y 2,9(10),16(17), 23(24)-tetrakis[4-(fenilselanil)]ftalocianinato de zinc(II) (PcSe2) con la finalidad de evaluar la potencial actividad antifúngica frente al Aspergillus flavus ATCC 073167 mediante inactivación fotodinámica.Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CIM) del Aspergillus flavus mediante el método de microdilución en caldo. El medio de cultivo empleado es el RPMI-1640 (con glutamina y un indicador de pH sin bicarbonato) suplementado con glucosa en una concentración final de 2%, y con MOPS [ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico] como buffer en una concentración final de 0,165 mol/L, pH 7,0. Se incubaron suspensiones fúngicas a diferentes concentraciones de los PS para obtener la concentración de fármaco final requerida y la densidad de inóculos (inóculos finales = 0,5-2,5 x 105 CFU / ml). Luego, las placas de microdilución se incubaron en la oscuridad durante 3 horas a 37 ° C. Los cultivos se expusieron a la luz a diferentes tiempos (5 min, 15 min y 30 min). La fuente de luz consistía en una lámpara halógena de 500 W, un tanque de agua para enfriamiento y un filtro de vidrio de color de 610 nm. La tasa de fluencia (λ> 610 nm) fue de 15 mW / cm-2. Una iluminación de 30 min condujo a una fluencia total de 27 J / cm2.Los cultivos de Aspergillus luego se incubaron en la oscuridad durante 24-48 horas a 37 ° C. Se prepararon controles de crecimiento fúngico (sin droga) y de esterilidad del medio por placa. Los experimentos de control se llevaron a cabo con PS en presencia y ausencia de luz. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado.Las actividades fungistáticas o fungicidas se determinaron separando cada muestra en una placa de agar Sabouraud y cultivando las muestras 24-48 horas a 37 ° C.Se logró sintetizar eficientemente PcSe1 y PcSe2 y se comprobó que en ausencia de luz no inhiben el crecimiento fúngico y que ejercen un efecto fungistático al ser irradiados durante 30 minutos a concentraciones 1 M y 10 M, respectivamente.