INVESTIGADORES
CUESTAS Maria Lujan
congresos y reuniones científicas
Título:
Detección de mutantes YMDD-resistentes en pacientes con hepatitis B mediante el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción.
Autor/es:
GENTILE, EA; CASTILLO, AI; CUESTAS, ML; MATHET, VL.
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Jornada; VII Jornadas Científicas de AECUBA; 2009
Resumen:
A pesar de que en la actualidad existen distintos análogos de núcleos(t)idos para el tratamiento de la hepatitis B crónica, dentro de la población de virus circulantes hay una gran variedad de cepas resistentes. En consecuencia es de vital importancia el desarrollo de técnicas que permitan la detección temprana de dichas mutantes. Actualmente la técnica más empleada para su detección es la secuenciación nucleotídica del gen Pol,  principal blanco de acción de los análogos de núcleos(t)idos. El costo de dicha técnica es elevado, requiere equipamiento especializado y personal altamente entrenado. Además solo detecta cuasiespesies que representan un porcentaje mayor al 40% de la población presente en el hospedador. En el presente trabajo se describe una técnica de detección de mutantes basada en el polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP). Esta consiste en la amplificación parcial del gen Pol por PCR utilizando cebadores específicos y la posterior digestión con las enzimas de restricción Fok I y Nla III. Por otro lado se realizó la secuención nucleotídica de dichos amplicones. La técnica de RFLP desarrollada permite detectar la existencia de mutantes YIDD o YVDD, aún presentes en baja proporción en la población viral (10%).  De la comparación entre ambas técnicas surge que la RFLP ofrece ventajas como:1) detección de cuasiespecies minoritarias que presentan mutaciones en el dominio YMDD, 2) menor costo y 3) la posibilidad de implementarla en laboratorios de mediana complejidad; mostrándose como una metodología accesible para determinar eficazmente la terapia antiviral más adecuada para cada paciente.