Evolución temporal de variantes genómicas del virus de la hepatitis B (HBV) asociadas a la resistencia a 3TC.

MATHET VL, CUESTAS ML, RIVERO C, FLEMING X, MINASSIAN ML, RUIZ V, OUBIÑA, JR

Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Resumen: OBJETIVO: Investigar las poblaciones circulantes de HBV asociadas a la resistencia a 3TC en un paciente que recibió subsiguientemente Adefovir (ADV).PACIENTE, MATERIALES Y MÉTODOS: Paciente adulto con hepatitis crónica (12 años de evolución), HCV [-] y HIV [-]. Recibió inicialmente tratamiento combinado de Inteferón PEG (6 meses) y 3TC (1 mes). En reemplazo de 3TC fue tratado con ADV (5 meses conjuntamente con Interferón PEG y luego 19 meses de monoterapia con ADV). Se analizaron muestras séricas correspondientes al momento del fracaso terapéutico con 3TC y otra al cabo de 24 meses de terapia con ADV. Se investigó cuali- y cuantitativamente el DNA de HBV sérico por PCR del gen S. Se clonó el fragmento amplificado en E. coli. Se realizó un análisis filogenético con las secuencias obtenidas. Se desarrolló un método capaz de detectar la contribución de poblaciones minoritarias- para determinar la presencia de variantes virales asociadas a la resistencia a 3TC en las posiciones 528 y 552 mediante RFLP del DNA amplificado. Se evaluó por secuenciamiento nucleotídico el polimorfismo de la posición 521. RESULTADOS: La carga viral persistió detectable durante el tratamiento con 3TC y en el comienzo del mismo con ADV (3,2 x 106 Eq gen/ml). El análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas indicó que la cepa correspondía al genotipo A. Se observó al momento del fracaso terapéutico con 3TC la cocirculación de variantes virales de estirpe salvaje (sensible a dicho antiviral) junto a otras que exhibían mutaciones asociadas a resistencia (M204V, M204I; L180M), las que contribuyeron en proporciones diferentes a la población viral total, según se observó en el análisis semi-cuantitativo de las bandas de restricción. Al cabo de 24 meses de tratamiento con ADV se detectó DNA viral sólo después de realizar una PCR hemi-anidada. Todas las variantes detectadas exhibieron secuencias nucleotídicas asociadas a resistencia al tratamiento con 3TC (L180M y M204V). No se detectaron variantes M204I ni sensibles a 3TC.CONCLUSIONES: Se describe el desarrollo de un método para la detección de mutaciones genómicas del HBV asociadas a la resistencia a 3TC (posteriormente utilizada en otros 12 pacientes). Este método permitió documentar la diferente contribución de las mutantes estudiadas así como su persistencia temporal diferencial aún en presencia del tratamiento con ADV por 24 meses.