Influencia de la proteína No Estructural 5A del virus de la hepatitis C sobre la transcripción de genes involucrados en la detoxificación del hígado

RIVERO CW, MINASSIAN ML, CUESTAS ML, ROSSO N, TRINKS J, TIRIBELLI C, OUBIÑA JR, MATHET VL

Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

INTRODUCCIÓN: La proteína no estructural 5A (NS5A) del HCV interacciona con un amplio número de factores celulares, lo que afecta numerosas funciones de la célula hospedadora, tales como la modulación de las vías de transducción de señales, la apoptosis, el ciclo celular y la transcripción de genes. Las proteínas de la familia ABC (ATP Binding Cassette transporters) son bombas transmembrana, dependientes de ATP, que transportan sustratos en contra de gradiente. MDR1 y 3 (Multi Drug Resístance), MRP1 y 2 (MDR-associated protein) y BCRP (Breast Cancer Related Protein) son proteínas que están involucradas en procesos de detoxificación celular. Según reportes previos, NS5A promueve la transcripción de mrp2 al interaccionar con HNF1 (Hepatic Nuclear Factor 1), lo que tendría significativas implicancias en la resistencia a drogas antitumorales y antivirales. OBJETIVO: Estudiar el efecto de la expresión de NS5A en células Huh7 (estirpe hepatocitaria) y HeLa sobre los distintos mRNAs que codifican para proteínas de la familia ABC. MATERIALES Y MÉTODOS: Se transfectaron células Huh7 y HeLa con un plásmido que codifica NS5A. Controles: a) cultivos que expresaban las proteínas X (HBV) y Core (HCV), y b) células sin transfectar. Se extrajo el RNA y se realizó la transcripción inversa con hexámeros y la PCR en Tiempo Real con cebadores específicos para mrp1 y mrp2, mdr1 y mdr3, bcrp y 18S. RESULTADOS: Se documentó que la presencia de NS5A produjo una disminución del 50% en la expresión relativa de los genes mrp1 y mrp2 en células de estirpe hepatocitaria, mientras que en células HeLa no se observó modificación alguna. En cambio, en esta última línea celular, otra proteína de HCV (Core) disminuyó la expresión de los genes antes mencionados (20 y 30%, respectivamente). La expresión de HBx en Huh7, por el contrario, demostró un marcado aumento en la expresión relativa de mrp1 y 2 (90 y 70% respectivamente). Al estudiar otros transcriptos, se observó que NS5A disminuyó la expresión de mdr1 y mdr3 (en Huh7) y de bcrp (HeLa). CONCLUSIONES: La diferencia en la expresión relativa de mrp1 y mrp2 observada al comparar cultivos de diferentes estirpes que expresan NS5A podría implicar que esta proteína ejercería su efecto a través de factores presentes solamente en células hepatocitarias. La disminución de la expresión de los genes antes mencionados producida por otra proteína de HCV (Core) se llevaría a cabo a través de mecanismos diferentes a los utilizados por NS5A. De manera inversa a los efectos antes propuestos, la proteína HBx induciría la expresión de los genes mrp1 y  mrp2 debido a su interacción con HNF1 (presente en células de estirpe hepatocitaria) como fue demostrado por otros grupos. La disminución de la expresión de genes relacionados con la detoxificación hepática mediante NS5A podría producir la acumulación de constituyentes biliares tóxicos, lo que favorecería la colestasis de los pacientes infectados con HCV conduciendo a un daño hepatocelular considerable. Este hallazgo podría ser relevante para la dilucidación de mecanismos patogénicos en pacientes sometidos a transplante hepático que exhiben una hepatitis C recurrente asociada a hepatitis colestásica fibrótica.