Técnica rápida y sencilla para la extracción y amplificación del ADN de Dermatofitos

SORDELLI A; RODRIGUEZ DEL VALLE N; CUESTAS ML; CARNOVALE S

Congreso; INFOCUS 2015; 2015

Los dermatofitosson hongos filamentosos que  tienen lacapacidad de invadir los tejidos queratinizados del ser humano humano y de losanimales causando infecciones que se denominan dermatoficias. La identificacióndel género y especie de estos hongos utilizando métodos convencionales es aveces dificultosa debido a que pueden presentar una macro y micro morfologíaatípica. Los estudios moleculares, como la amplificación de genes por PCR y suposterior secuenciación nucleotídica, se presentan como una alternativa parauna rápida identificación de los mismosEl objetivo deeste trabajo es presentar una técnica rápida y sencilla para la extracción delADN fúngico de diversos aislamientos clínicos de dermatofitos y su posterioramplificación mediante PCR usando primersuniversales.Para ello, seanalizaron 20 cepas de dermatofitos previamente identificados macro y micromorfológicamenteprovenientes de escamas de pelos, piel y uñas. Se utilizó la técnica deextracción descripta  por Makimura et al, donde las colonias fueronlisadas con un buffer específico, sometidas a tratamientos térmicos con ciclosde congelamiento-descongelamiento, con la posterior extracción del ADN usandofenol/cloroformo/alcohol isoamílico. Luego de su extracción, se realizó unalectura espectrofotmétrica  a laslongitudes de onda 230, 260 y 280 mediante NanoDrop para cuantificar y analizarsu pureza. Posteriormente, el ADN extraído se utilizócomo templado para la reacción de amplificación por PCR utilizando los primers ITS1 eITS4. Losproductos de amplificación se separaron electroforéticamente en un gel deagarosa  al 1%  teñido con bromuro de etidio (0,5 µg/ml).. Los resultadosde las lecturas espectrofotométricas del material extraído evidenciaron altosrendimientos y alta pureza del ADN en todos los casos. Los productos de PCR presentaronun tamaño de amplicón esperado (600 pb).Dichosresultados sugieren que el método empleado demostró ser una herramienta útil ysencilla para la extracción y amplificación de ADN de dermatofitos  para ser empleado posteriormente en técnicasde secuenciación nucleotídica.