INVESTIGADORES
CUESTAS Maria Lujan
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de variantes del antígeno de superficie del virus hepatitis B (HBsAg) para mejorar la eficacia de la vacuna actualmente comercializada
Autor/es:
PERAZZO P; EGUIBAR N; SORDELLI A; RODRIGUEZ DEL VALLE N; GONZALEZ R; NUSBLAT A; CUESTAS ML
Reunión:
Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015
Resumen:
La circulación de mutantes del antígeno de superficie del virushepatitis B (HBsAg) en presencia de anticuerpos anti-HBs tanto en pacientes querecibieron una adecuada inmunización activa/pasiva, como así también enindividuos con hepatitis B crónica durante el curso natural de la infecciónconstituye un importante problema de Salud Pública. D144A y G145R son lasmutantes de escape más ampliamente reportadas en el mundo y no están incluidasen las vacunasanti-HBV actualmente comercializadas.Objetivos: optimizar la expresión en células eucariotas del gen s salvaje y mutado en las posicionesD144A yG145R y caracterizar su interacción con anticuerpos neutralizantes paraHBsAg salvaje. Materiales y métodos: los genes correspondientes alHBsAg salvaje y mutado fueron sintetizados y clonados en el vector de expresión pPICZa y pTriEx®-63C/LICy transformados en la cepa Pichia pastoris X-33 otransfectados en distintas células de mamífero, respectivamente (CHO, HeLa, Huh 7, HEK293). Para la transfección,se ensayaron diferentes condiciones  (distintos agentes de tansfección,medios de cultivos, tiempos de transfección, presencia o no de DMSO 1,25%). Para la detección delHBsAg, se tomaron muestras a distintos tiempos y se realizaron ensayos de ELISAcomercial y Western blot. Se caracterizaronlas VLPs y se midió la reactividad del HBsAg mutado y salvaje in vitro (TEM y DLS) e in silico. Resultados: se logró una moderada expresión en las célulasHEK293 transfectadas con L-PEI con una relación N/P = 10, a las 144 hpost-transfección. Con P. pastoris,se obtuvieron mayores niveles de expresión, y las VLPs obtenidas presentaron untamaño aproximado de 20 nm y la reactividad con los anticuerpos anti-HBs fuevariada.Conclusiones: laoptimización de la expresión del HBsAg salvaje y mutado en células de mamífero yen P. pastoris constituye una primeraaproximación para un potencial subsiguiente uso para la obtención de futurasvacunas anti-HBV con superior espectro antigénico.