Efecto de la proteína X del virus hepatitis B (HBV) sobre la regulación de la apoptosis, la proliferación y la inmortalización celular

CUESTAS ML; CASTRONUOVO CC; CASTILLO AI; DELFINO MC; GENTILE EA; OUBIÑA JR; MATHET VL

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Introducción. El carcinoma hepatocelular (HCC) representa el 70-85% de los tumores malignos hepáticos en el mundo. La infección crónica por el virus hepatitis B (HBV) contribuye con más de un 75% a los casos de HCC, siendo una de las causas más frecuentes de esta enfermedad. La proteína X del HBV desempeña un rol principal en la oncogénesis hepática. Según reportes en la literatura internacional, la triple mutante de X, I127T/K130M/V131I exhibe una actividad transactivadora  mayor que la  forma salvaje, contribuyendo significativamente a la hepatocarcinogénesis. Objetivo. Estudiar comparativamente los efectos de la expresión de la proteína X salvaje (Xsal) y de la triple mutante I127T/K130M/V131I (Xmut) del HBV sobre los niveles de ARNm de telomerasa (h-Tert), bcl-2 y bax y sobre los niveles de expresión de diversas proteínas involucradas en la apoptosis, proliferación celular e inmortalización como caspasa 3, caspasa 9, gankirina, tanquirasa, c-IAP1, c-IAP2 y c-Myc. Materiales y métodos. La línea celular Huh7 fue transfectada con plásmidos que codifican para la proteína Xsal y Xmut del HBV. Al cabo de 24 y 72 h. de expresión transitoria, los niveles de ARNm de bax, bcl-2 y h-ert fueron evaluados mediante una RT-PCR-Multiplex semicuantitativa, mientras que la expresión de las proteínas c-Myc, c-IAP 1 y 2, caspasas 3 y 9, tanquirasa y ganquirina se estudiaron mediante Western Blot. Todos los resultados fueron comparados con aquellos obtenidos en la línea celular HepG2.2.15, establemente transfectada con el replicón del HBV (expresa x salvaje). El análisis estadístico se realizó usando el test t deStudent y los resultados se expresaron como la media ± desvío estándar (p < 0,05). Resultados. Altos niveles de expresión de Xsal y Xmut (24 h. post-transfección) aumentan la expresión de los genes anti-apoptóticos bcl-2, c-IAP1, c-IAP2 y ganquirina Sin embargo,  bajos niveles de expresión de Xsal y Xmut (72 h. post-transfección) disminuyen la expresión de algunos de estos genes anti-apoptóticos y  no poseen efecto significativo sobre los restantes. La relación entre los ARNm de bcl-2 / bax estuvo incrementada a las 24 h. pero fue igual al control a las 72 h. post-transfección. Conclusiones. Estos resultados sugieren que los niveles elevados de X - independientemente de su naturaleza salvaje o mutada- inhibirían la apoptosis, mientras que bajos niveles de esta proteína promoverían este proceso de muerte celular. Los resultados observados con Xsal y Xmut a altas concentraciones se correlacionan con los obtenidos en las células del replicón del HBV.