Estudio de la expresión y la actividad funcional de dos miembros de la superfamilia de transportadores ABC (MDR1 y BCRP) en el contexto de un sistema de replicación in vitro del virus hepatitis C: Nuevas estrategias para optimizar la terapéutica

GENTILE, EA; CASTRONUOVO, CC; CUESTAS, ML; CASTILLO, AI; DELFINO, CM; ANDREETTA, AM; OUBIÑA, JR; SOSNIK, A; MATHET, VL

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Introducción: El virus Hepatitis C (HCV) es uno de los principales agentes etiológicos de hepatitis viral humana. No existe aún una vacuna efectiva para prevenir las enfermedades causadas por dicho virus. El tratamiento empleado actualmente para la hepatitis C crónica tiene una baja efectividad, es genotipo-dependiente y produce frecuentes efectos adversos. Se estima que más de 170 millones de personas en el mundo están crónicamente infectadas y el 20% de éstas puede desarrollar cirrosis, un factor de alto riesgo para la génesis del hepatocarcinoma celular. Existen escasos reportes que documentan la acción transactivadora de proteínas del HCV sobre algunas de las proteínas ABC (ATP-binding cassette), alterando la sensibilidad a las drogas en las células infectadas. Las ABC son bombas transmembrana activas que transportan sustratos en contra del gradiente de concentración. Una de las estrategias que se están evaluando para mejorar la eficacia de la farmacoterapia antiviral y anticancerosa es la formulación de fármacos donde el compuesto activo esté acompañado de co-polímeros segmentados de poli(óxido de etileno) y poli(óxido de propileno): poloxámeros y poloxaminas. Estos co-polímeros en forma de unímeros inhibirían la actividad de las bombas ABC promoviendo una concentración intracelular adecuada de droga para que sea eficaz. Objetivos: Estudiar la expresión y la actividad funcional de las proteínas MDR1 y BCRP en un sistema de replicación in vitro del HCV. Analizar la citotoxicidad de poloxámeros y poloxaminas en este sistema y su efecto sobre la actividad de dichas ABC. Materiales y Métodos: En células establemente transfectadas con el replicón del HCV genotipo 1b (Huh7.5 SG y FL), se evaluó mediante RT-qPCR la variación en la expresión relativa de los genes mdr1 y bcrp. La detección de la expresión de las proteínas se determinó mediante Western blot. Asimismo, se incubaron estas células con las poloxaminas T304, T904, T1107 y T1301 y el poloxámero F127 a diversas concentraciones (1%; 0,1%; 0,01%). Luego de 24h se analizó la citotoxicidad de dichos co-polímeros por citometría de flujo. Finalmente, se analizó el efecto de estos co-polímeros sobre la actividad de las bombas ABC. Resultados: Se demostró una variación en la expresión de genes ABC al compararse con las células control. Todos los co-polímeros fueron citocompatibles a baja concentración. A mayores concentraciones T904 y T1301 indujeron una marcada citotoxidad. Los co-polímeros T304, T904 y T1301 presentaron un efecto inhibidor de la actividad de las bombas ABC. Conclusiones: Se logró estudiar la acción de la replicación in vitro del HCV en relación a la expresión y funcionalidad de MDR1 y BCRP. La inhibición de la actividad funcional de las bombas ABC por parte de poloxámeros y poloxaminas constituye una nueva evidencia de la alta versatilidad de estos co-polímeros como potenciales adyuvantes en la farmacoterapia de las enfermedades hepáticas.