Efecto de la proteína No estructural 5A (NS5A) del Virus Hepatitis C (HCV) sobre las proteínas de membrana translocadoras de fosfolípidos MDR3 y Escramblasa (SCR)

RIVERO, CW; GENTILE, EA; CUESTAS, ML; CASTILLO, AI; DELFINO, CM; CASTONUOVO, CC; ANDREETTA, AM; OUBIÑA, JR; MATHET, VL

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

El HCV es uno de los principales agentes etiológicos de hepatitis viral humana. La infección aguda por HCV es generalmente asintomática y se resuelve favorablemente sólo en el 15-40 % de los casos. En el 60-85% remanente la infección evoluciona hacia la cronicidad y entre los individuos persistentemente infectados, alrededor del 20% puede desarrollar cirrosis al cabo de 10 a 20 años. La cirrosis relacionada a la infección por el HCV es un factor de alto riesgo para el HCC, cuya incidencia anual es del 1-4%. El mantenimiento de la asimetría de la membrana en células normales y la destrucción de la misma por eventos de activación celular, coagulación y apoptosis están vinculados con la translocación de fosfolípidos (PL). Esta asimetría es regulada por dos clases diferentes de proteínas de membrana translocadoras de PLs: una dependiente de ATP (MDR3) y otra independiente de dicha molécula (SCR). MDR3 pertenece a la Familia de Proteínas ABC y SCR a la familia de genes regulados por IFN. Estudios de microdisposiciones de DNA realizados en chimpancés persistentemente infectados con HCV demostraron un aumento considerable en la expresión de SCR.Objetivos: Estudiar el efecto de NS5A de HCV sobre la expresión relativa de los mRNAs y la actividad funcional de SCR y MDR3.Metodología: Se estudió por medio de RT PCR en Tiempo Real la expresión relativa de los mRNAs de scr y mdr3 en células HeLa y Huh7 transfectadas transitoriamente con NS5A, e inducidas con staurosporina (STR) a diferentes tiempos. Se estudió la actividad de SCR y MDR3 mediante ensayos con Anexina V-FITC medidos por citometría de flujo.Resultados: Se observó un aumento significativo en la expresión de scr en células HeLa tranfectadas transitoriamente con NS5A. Dicha línea celular no presentó cantidades detectables de mRNA de mdr3. Paralelamente, en la línea celular hepatocitaria (Huh7) no hubo variación estadísticamente significativa en la expresión de mdr3 luego de la expresión de NS5A, pero se observó un discreto aumento de scr. El aumento en los niveles de mRNA de scr antes mencionado no se correlacionó con el porcentaje de células Anexina V-positivas. Por el contrario, cuando los cultivos que expresaban NS5A fueron tratados con STR se evidenció un aumento en el nivel de células apoptóticas. A su vez, se observó un efecto sinérgico entre NS5A y STR para la translocación de la PS, puesta de manifiesto como un evento de aceleración del proceso de apoptosis.Discusión: La falta de correlación entre el nivel de mRNA de scr y el porcentaje de células apoptóticas -en células que expresaban transitoriamente NS5A- sugiere que la sobre-expresión de SCR no es suficiente para producir apoptosis, necesitando de un estímulo para su inducción.Conclusiones: Se documentó un aumento en la expresión relativa del mRNA de scr por efecto de la proteína NS5A de HCV. Esto podría sensibilizar a las células infectadas con HCV a la apoptosis inducida por activación de SCR. Por el contrario, no se observó variación en la expresión de mdr3.