Inhibición de la actividad funcional de diversas proteínas de la superfamilia de transportadores ABC por poloxaminas en líneas celulares de estirpe hepatocitaria.

CUESTAS, ML; MATHET, VL; SOSNIK, A

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011

Introducción: Las poloxaminas son copolímeros anfifílicos de poli(óxido de etileno) (PEO) y poli(óxido de propileno) (PPO) que poseen una estructura ramificada y dos grupos amina terciaria centrales que les confiere dependencia del pH. En concentraciones superiores a la concentración micelar crítica, estos copolímeros se autoagregan formando estructuras nanoscópicas denominadas micelas poliméricas, las cuales han sido explotadas para encapsular y estabilizar químicamente fármacos poco solubles en agua. Además, estos copolímeros han demostrado actividad como inhibidores de proteínas pertenecientes a la superfamilia ABC (ATP-binding cassette). Las ABC son bombas transmembrana activas que transportan sustratos en contra del gradiente de concentración. Su sobre-expresión está íntimamente asociada a la resistencia a múltiples fármacos como antitumorales y antivirales. Una nueva línea de investigación en nuestro grupo es estudiar estrategias nanotecnológicas para optimizar la farmacoterapia de hepatitis virales y el hepatocarcinoma asociado. Objetivo: estudiar el efecto de poloxaminas con diferencias estructurales (peso molecular y balance hidrofílico-hidrofóbico) sobre la citotoxicidad y la actividad funcional de las proteínas ABC P-gp, MRP1 y BCRP en 2 líneas celulares de hepatoma humano. Materiales y Métodos: Se incubaron células Huh7 y HepG2 con las poloxaminas T304, T904, T1107 y T1301 a diversas concentraciones (1%; 0,1%; 0,01%). Al cabo de 24 h se analizó mediante citometría de flujo la citotoxicidad de dichos copolímeros a las concentraciones ensayadas. La capacidad inductora de apoptosis se estudió con anexina V-FITC/yoduro de propidio y calculando el porcentaje de hipodiploidía como así también mediante la evaluación del potencial de membrana mitocondrial con Rhodamina 123. También se estudió la hepatotoxicidad in Vitro mediante la determinación del nivel de las enzimas hepáticas GOT y GPT en los sobrenadantes celulares. Finalmente se estudió la actividad funcional de las bombas ABC utilizando DiOC2, Rhodamina 123 y vinblastina. Resultados: Todas las poloxaminas fueron citocompatibles a baja concentración (0,01%). Sin embargo, a concentraciones más elevadas (0,1 y 1%), T904 y T1301 indujeron una marcada citotoxidad. Asimismo, todas las poloxaminas, excepto T304 produjeron un arresto en el ciclo de división celular (fase G2/M). Por último, a concentraciones no citotóxicas T904 y T1301 al igual que T304 al 0.1 y 1% presentaron un efecto inhibidor de la actividad funcional de algunas proteínas ABC. No se observó efecto inhibidor alguno con T1107 en las concentraciones ensayadas. Conclusiones: El efecto inhibidor de T304, T1301 y T904 sobre la actividad funcional de BCRP y MRP1 constituye nueva evidencia de la alta versatilidad de estos copolímeros como nanotransportadores de fármacos y como potenciales adyuvantes en la farmacoterapia de las enfermedades hepáticas.