Efecto de la proteína X del virus hepatitis B (HBV) sobre la superfamilia de transportadores ABC: un nuevo rol en la patogénesis viral

CUESTAS, ML; RIVERO, C; ROSSO, N; GENTILE, E; CASTILLO, A; MINASSIAN, ML; ANDREETTA, A; TRINKS, J; TIRIBELLI, C; OUBIÑA, JR; MATHET, V

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Introducción: Los carcinomas hepatocelulares (HCC) representan el 4% de los tumores de todo el mundo siendo la quinta causa de cáncer en el hombre. Cerca del 80% de los pacientes con este cáncer se encuentran crónicamente infectados con el HBV. La proteína X del HBV desempeña un rol principal en la oncogénesis hepática. Las mutantes K130M y V131I exhiben una actividad transactivadora mayor que la salvaje, lo que implica que estas mutantes pueden contribuir significativamente a la hepatocarcinogénesis. Las proteínas ABC son bombas transmembrana activas que transportan sustratos en contra del gradiente de concentración, utilizando la hidrólisis de ATP como fuente de energía. Su sobreexpresión está asociada a la resistencia a múltiples drogas. Asimismo, existen evidencias que asocian la sobreexpresión de algunos de estos miembros con la inhibición de la vía intrínseca de la apoptosis y el cáncer. Objetivo: Analizar el efecto de la expresión de las proteínas X salvaje y mutada del HBV sobre los niveles de ARNm y sobre los niveles de expresión de diversas proteínas de la superfamilia ABC. Materiales y Métodos: Se transfectaron transitoriamente células HeLa y Huh7 con plásmidos que codificaban para la proteína X salvaje y mutada (K130M/V131I) del HBV. Al cabo de 24 h se les evaluó mediante RT-PCR en tiempo real la variación en la expresión relativa de los genes que codifican para las proteínas ABC BCRP, MDR1, MRP1 y MRP2. La detección de la expresión de las proteínas BCRP, MDR1 y MRP1 se realizó mediante Western blot utilizando anticuerpos monoclonales específicos. Resultados: En las células HeLa se evidenció: 1) una disminución en la expresión del gen mrp1 debido a la expresión de la proteína X salvaje, mientras que en aquellos cultivos celulares que expresaban la proteína X mutada la expresión de dicho gen celular se mantuvo dentro de los niveles normales; 2) un incremento en la expresión de los genes bcrp y mrp2 debido a la expresión de la proteína X mutada. No se evidenció una variación estadísticamente significativa en la expresión de ambos genes cuando los cultivos celulares expresaban proteína X salvaje, al compararse con las células control. En las células Huh7 se evidenció: 1) un aumento en la expresión de los genes mrp1 y mrp2 debido a la expresión de la proteína X mutada, mientras que en aquellos cultivos celulares que expresaban la proteína X salvaje la expresión de ambos genes celulares se mantuvo dentro de los niveles normales; 2) un incremento en la expresión del gen bcrp debido a la expresión de la proteína X salvaje mientras que en aquellos cultivos que expresaban la proteína X mutada, la expresión de dicho gen celular se mantuvo dentro de los niveles normales; 3) no se observó variación en la expresión del gen mdr1 por la proteína X salvaje ni por la mutada. Los resultados en el Western blot se correlacionaron con los de RT-PCR en tiempo real. Conclusiones: Al estudiar el efecto de las proteínas X salvaje y mutada sobre los niveles de ARNm correspondientes a los genes bcrp, mdr1, mrp1 y mrp2 por RT-PCR en tiempo real, se observó un comportamiento dependiente de la estirpe celular estudiada (hepatocitaria vs epitelial) y de la naturaleza salvaje o mutada de la proteína X. Merece especial consideración la observación de un aumento en los niveles de expresión de los genes mrp1, mrp2 y bcrp en células Huh7, con potenciales nuevas implicancias en la oncogénesis hepática y en la resistencia a drogas antivirales y antitumorales.