Estudio del efecto de diferentes dosis del Virus de la Bursitis Infecciosa sobre la Bursa de Fabricio

JUAN MANUEL CARBALLEDA,; SILVINA CHIMENO ZOTH,; EVANGELINA GÓMEZ,; MARÍA JOSÉ GRAVISACO; AGUSTÍN VENZANO; ANALÍA BERINSTEIN

Capital Federal

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

AAM

El virus de la Bursitis Infecciosa (IBDV, Birnaviridae) es agente causal de una enfermedad aguda y altamente contagiosa que ataca especialmente a pollos jóvenes produciendo, en los casos severos, inmunosupresión. IBDV se contagia mayormente por vía oral y replica extensivamente en la Bursa de Fabricio. Este órgano es exclusivo de aves y es esencial para la amplificación y diferenciación de los progenitores de linfocitos B. Este trabajo propone determinar la dosis óptima de IBDV (cepa LZD de virulencia intermedia) capaz de producir alteraciones a nivel celular e histopatológico en la Bursa de Fabricio a fin de disponer de un modelo de infección contra el cual poder evaluar, a futuro, la eficacia de nuevos inmunógenos o de agentes antivirales. Se inmunizaron oralmente pollos White Leghorn libres de patógenos específicos, con diferentes dosis (50, 200 y 500 µl) del virus (9,2 x 103 TCID50 / ml). Los animales se sacrificaron a 3 y 5 dpi y se les extrajo la bursa para realizar diferentes ensayos. Una porción del órgano se sumergió en solución fijadora, para su posterior procesamiento histológico, tinción hematoxilina-eosina y observación histopatológica. Otra pequeña porción se conservó en solución estabilizadora para posterior extracción de ARN, síntesis de ADNc y ensayos de PCR en tiempo real para cuantificar la expresión de diversas citoquinas aviares. Por último, otra fracción del órgano fue procesada para el aislamiento de células mononucleares por centrifugación en gradientes de ficoll y posterior tinción con anticuerpos monoclonales específicos para marcadores linfocitarios conjugados con diferentes fluorocromos y análisis por citometría de flujo. Los resultados de la observación histopatológica mostraron el incremento del daño histológico en relación al aumento de la dosis de IBDV, siendo el efecto generado por la menor dosis indistinguible del control negativo. Las dosis restantes ocasionaron, en grado creciente, alteraciones compatibles con infección por IBDV: depleción linfoide, aparición de cuerpos apoptóticos, modificación del epitelio córtico-medular y engrosamiento del estroma folicular, infiltración de células inflamatorias y edema, entre otras. Estas modificaciones se observaron con mayor claridad a los 5 dpi. Por otra parte, los análisis por citometría de flujo mostraron que sólo las bursas provenientes de los pollos inoculados con 500 µl de IBDV evidenciaban la presencia de linfocitos T. Esta infiltración de células T en la bursa ha sido previamente reportada como un fenómeno característico que ocurre luego de la llegada del virus a la bursa. Finalmente, la cuantificación de citoquinas mostró una fuerte respuesta inflamatoria en la bursa. Al utilizar la dosis de 500 µl de IBDV se observó una  sobreexpresión de IL-6 a 3 y 5 dpi, siendo más fuerte en el primer tiempo. Los resultados obtenidos permitieron determinar la dosis de 500 µl de IBDV como la más adecuada para reproducir aspectos típicos de la infección en la Bursa de Fabricio y será utilizada en futuros ensayos tendientes a evaluar la eficacia de nuevas vacunas contra este patógeno.