ESTUDIO DEL PERFIL DE CITOQUINAS AVIARES POR PCR EN TIEMPO REAL: APLICACIÓN AL ANÁLISIS DE LA RESPUESTA INMUNE AL VIRUS DE LA BURSITIS INFECCIOSA

CARBALLEDA J. M.; CHIMENO ZOTH S.A; GOMEZ, E; GRAVISACO M. J.; BERINSTEIN, A

Córdoba

Jornada; Jornada Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virología

El estudio de la expresión de citoquinas utilizando anticuerpos monoclonales está ampliamente difundido en mamíferos. La falta de anticuerpos comerciales constituye un factor limitante para utilizar estrategias semejantes para el estudio de citoquinas aviares. De todos modos, la publicación de la secuencia del genoma completo del pollo (Gallus gallus) y la posterior caracterización génica de citoquinas ha permitido el desarrollo de metodologías para el estudio de la respuesta inmune basadas en el análisis de la expresión génica. El propósito de este trabajo fue desarrollar una técnica para analizar el perfil de expresión de citoquinas utilizando PCR en tiempo real y aplicarla al análisis de la respuesta inmune aviar frente al virus de la bursitis infecciosa (IBDV). IBDV es un virus de ARN doble cadena, pertenece a la familia Birnaviridae y es un importante patógeno aviar que induce supresión del sistema inmune. Se obtuvo el ARN total del bazo de pollos White Leghorn de 20 días de edad, se realizó la retrotranscripción y se amplificaron fragmentos de 200 pb de cada una de las regiones codificantes de citoquinas aviares (IL-6, IL-8, IL-15, INFg, INFa, TNFa, TGFb) y de la enzima GAPDH, para ser usado como control de carga.. Posteriormente, los fragmentos fueron clonaron y la secuencia nucleotídica de cada uno de ellos fue confirmada. El ADN recombinante fue cuantificado a fin de obtener curvas estándar por PCR en tiempo real. Una vez lograda la puesta a punto de dicha metodología, la misma fue aplicada al estudio de la respuesta inmune innata frente al IBDV,. Se inocularon pollos de 20 días de edad con la cepa D78 de IBDV y se analizó la expresión génica de las nombradas citoquinas a las 24 y 48 horas post inoculación (hpi) en bazo, duodeno y tonsilas cecales. Los resultados obtenidos indican una marcada sobreexpresión de TNFa, TGFb, IL-6 e INFa (10-30 veces) en el duodeno a las 24 hpi, resultado que no se repitió a las 48 hpi, tiempo en el cual la citoquina antiinflamatoria TGFb se encontró sobreexpresada (30 veces) en bazo. Por otra parte, no se observó sobreexpresión de las citoquinas estudiadas en tonsilas cecales. Los resultados del presente trabajo dan cuenta de que la infección con IBDV provoca la sobreexpresión de citoquinas inflamatorias y de la complejidad de la respuesta inmune frente al virus que, en etapas posteriores, produce una fuerte inmunosupresión.