Levaduras biosupresoras de hongos perjudiciales de uva (San Juan)

M.C. NALLY; V.M. PESCE; M.E. TORO; F. VAZQUEZ; L.I. CASTELLANOS DE FIGUEROA

Neuquén

Jornada; II Jornada Patagónica de Biología de Levaduras; 2009

INTRODUCCIÓN: San Juan tiene el área cultivada más importante de uva de mesa de la República Argentina, con 7.165 ha. Las interacciones entre levaduras y hongos filamentosos en las uvas pueden desempeñar un papel fundamental en el biocontrol. OBJETIVO GENERAL: Estudiar los efectos antagónicos de levaduras indígenas de uva sobre hongos que intervienen tanto en la pudrición ácida como en la gris. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: A- Aislar e identificar levaduras (no patógenas) capaces de producir efectos antagónicos sobre hongos. B- Determinar los mecanismos responsables de la biosupresión de hongos fitopatógenos. MATERIALES Y MÉTODOS: A1- Aislamientos de hongos y levaduras de uva: Las levaduras fueron aisladas de uva sana, mostos de uva en fermentación y suelos vitivinícolas (YEPD- Agar) y los hongos de granos de uva en pudrición (Czapeck- Agar). A2- Verificación de antagonismos in vitro (placa): Se realizaron co- cultivos de levaduras y de hongos fitopatógenos aislados, en medio sólido (Czapeck Extracto de levadura- Agar), con el objetivo de seleccionar posibles agentes de biocontrol. A3- Verificación de antagonismos in vivo (uva): Sólo se evaluó la capacidad antagónica de aquellas levaduras que inhibieron a hongos en placas. Concentraciones y volúmenes determinados de levadura (1x106cel.ml-1, 10µl) y de hongo (1x104esporas.ml-1, 10µl) fueron inoculados en heridas realizadas en uva, incubadas a 25 y 2°C. Se consideró levadura biosupresora aquellas que disminuyeron la incidencia de la enfermedad fúngica en un 70% o más. B1- Detección del carácter killer en aislamientos de levaduras: Se evaluó la actividad killer de levaduras frente a levaduras (YEPD Bufferizado-Agar, MB, pH 4) y a hongos (Czapeck- Agar, MB, pH 4 y 5.5). B2- Producción de sideróforos: Se utilizó medio de cultivo CAS- HDTMA- Agar para la identificación de levaduras captadoras de hierro. B3- Producción de volátiles antifúngicos: Sobre dos bases de placas de Petri enfrentadas se sembró la levadura (YEPD- Agar) y el hongo (Czapeck- Agar), sin contacto. B4- Inducción de resistencia de a distancia: Las levaduras biosupresoras y hongos fueron inoculados simultáneamente en heridas en uvas a 1 cm de distancia entre ellos. RESULTADOS: A1- Se aislaron 235 levaduras (157 Saccharomyces y 78 no- Saccharomyces) y 9 hongos filamentosos (Botrytis cinerea, Aspergillus carbonarius, A. terreus, A. versicolor, A. caelatus, Penicillium comune, Fusarium oxysporum, Rhizopus stolonifer y Ulocladium sp.). A2- Los aislamientos de levaduras pertenecientes al género Saccharomyces tuvieron mayor actividad biosupresora que las No- Saccharomyces. A3- Algunos aislamientos de levadura suprimieron por completo el crecimiento de ciertos hongos: Saccharomyces cerevisiae: BSc49, BSc67, BSc140 a B. cinerea; Issatchenkia orientalis BIo148, Candida sake BCs192 y S. cerevisiae BSc110 a A. terreus. Sólo una levadura (S. cerevisiae BSc68) pudo inhibir a B.cinerea a 2 y 25ºC. B1- De las 235 levaduras aisladas, 206 presentaron fenotipo killer, en reacciones cruzadas entre ellas. Cuando las levaduras fueron sembradas sobre los hongos en estudio se observó mayor actividad killer a pH 4. B2- Siete levaduras biosupresoras fueron capaces de producir sideróforos: S. cerevisiae: BSc49, BSc140, BSc68, C.sake BCs192, Saccharomyces kluyveri BSk11, Candida catenulata BCc185, Debaryomyces vanrijiae BDv179. B3- Sólo dos levaduras produjeron compuestos antifúngicos volátiles S. cerevisiae BSc119 y S. kluyveri BSk11. B4- No se observó la presencia de levaduras que disminuyeran la incidencia de enfermedades fúngicas a distancia, en granos de uva. CONCLUSIONES: El análisis de la biodiversidad microbiana de la uva dio como resultado el aislamiento de levaduras capaces de controlar enfermedades fúngicas, las cuales constituyen un problema considerable tanto para la provincia de San Juan como para otras zonas vitivinícolas.