Formas vegetativas de Clostridium chauvoei disparan respuestas apoptóticas e inflamatorias sobre células de la inmunidad innata

CÁCERES CLAUDIA SOLEDAD; GALLO GIOVANNA LUCRECIA; COLOCHO, FLORENCIA; SILVA, JUAN; GARAY, JUAN; MATTAR, AÍDA

Rosario

Congreso; XXII Congreso y XL Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2020

Sociedad de Biología de Rosario

Clostridium chauvoei, es una bacteria Gram positiva, esporulada y anaerobia estricta,causante de la mancha, una enfermedad que induce mionecrosis fulminante sobre ganadobovino, provocando pérdidas económicas. A pesar de su importancia, no se poseenconocimientos sobre su inmunopatología. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efectosobre la viabilidad del macrófago (Mɸ) infectado con C. chauvoei y su posiblemecanismo en un modelo murino in vitro. Se trabajó con cultivos primarios de Mɸsperitoneales inflamatorios, obtenidos en ratón. Mɸs se infectaron con diferentesmultiplicidades de infección (MDI) de C. chauvoei (MDI= 5:1, 20:1 y 100:1 durante 24hs) y se analizó su efecto sobre la viabilidad celular por el ensayo de MTT. La apoptosisse estudió mediante tinción de Giemsa, Ladder y citometría de flujo. Además, laexpresión de iNOS y TNF-α se determinó mediante RT-PCR. Los resultados fueronevaluados estadísticamente utilizando el test chi cuadrado, con el sistema StatistixVersion 3.5, diferencias con p ≤ 0.05 fueron consideradas significativas. El análisis porcitometría de flujo se realizó con el Test Mann Witney, diferencias con p ≤ 0.05 fueronconsideradas significativas. A todas las MDI estudiadas, se observó una disminución deviabilidad con respecto al control. A MDI 20:1, se observó una mayor proporción decuerpos apoptóticos comparada al control sin infección, se identificó el patrón en escaleracaracterístico de apoptosis por electroforesis de DNA genómico en geles de agarosa. Elanálisis por citometría de flujo demostró mayor porcentaje de apoptosis que el observadopor tinción de Giemsa, a MDI 20:1. Por último, a MDI 20:1 se observó un incrementosignificativo en la expresión de iNOS y TNF-α con respecto al control sin infección. Losresultados obtenidos en nuestro laboratorio indican que C. chauvoei, al inducir cambiostranscriptómicos proinflamatorios dentro del Mɸ, conduce a un fenotipo apoptótico