Efecto de dehidroleucodina y xantatina sobre la organización del citoesqueleto de actina mastocitaria

VARGAS PATRICIA; PERSIA FABIO ANDRES; MARIANI MARIA LAURA; GALLO GIOVANNA LUCRECIA; MICHAUT MARCELA ALEJANDRA; PENISSI ALICIA BEATRIZ

Montevideo

Congreso; I Congreso Uruguayo de Anatomía y II Jornadas Argentinas de Anatomía Clínica; 2012

Asociación Uruguaya de Anatomía y Asociación Argentina de Anatomía Clínica

INTRODUCCIÓN Los mastocitos son células especializadas del tejido conectivo que participan activamente en la patogénesis de enfermedades inmunes e inflamatorias. La activación de mastocitos incluye aumento de calcio intracelular y posterior desensamblaje del complejo actina-miosina debajo de la membrana plasmática del mastocito, permitiendo la fusión de los gránulos a la misma y secreción de moléculas bioactivas preformadas (degranulación), como beta-hexosaminidasa. En trabajos previos hemos demostrado que dehidroleucodina y xantatina, previenen la formación de lesiones gastrointestinales inducidas por agentes ulcerogénicos y ejercen una potente actividad antiinflamatoria. Además hemos demostrado que ambos compuestos inhiben la degranulación inducida por el compuesto 48/80 y por neuropéptidos pro-inflamatorios. Sin embargo, se desconoce el mecanismo celular responsable del efecto estabilizador de estas lactonas. MATERIALES Y MÉTODOS Mastocitos peritoneales purificados fueron incubados con: 1) buffer ó 2) compuesto 48/80 (10 μg/ml) ó 3) lactona (dehidroleucodina 100 μM ó xanthatina 100 μM)+compuesto 48/80. Se realizó un estudio comparativo con el estabilizador de mastocitos cromoglicato de sodio. En las soluciones de incubación se cuantificó beta-hexosaminidasa (marcador de degranulación). En las células se estudió la concentración de beta-hexosaminidasa remanente (no liberada). También se analizó la vitalidad celular por exclusión del colorante azul tripán, se cuantificó el porcentaje de mastocitos activados y no activados y se analizó la organización estructural de F-actina por microscopía confocal con faloidina conjugada con el fluoróforo TRITC (rojo). Tratamiento estadístico: ANOVA-1/ Tukey-Kramer. RESULTADOS Dehidroleucodina y xantatina inhibieron la liberación de beta-hexosaminidasa y el aumento de mastocitos activados inducidos por el compuesto 48/80, sin modificar la viabilidad celular con respecto al grupo basal. Cromoglicato de sodio no inhibió la liberación de beta-hexosaminidasa ni el incremento del número de mastocitos activados inducidos por el compuesto 48/80 y no modificó la viabilidad celular con respecto al basal. Las células de los grupos basal y pretratados con las lactonas mostraron una distribución homogénea de los filamentos de actina, mientras que los mastocitos estimulados con compuesto 48/80 exhibieron una menor densidad de este entrecruzamiento. CONCLUSIONES La actividad estabilizadora de mastocitos ejercida por dehidroleucodina y xantatina está relacionada con la capacidad de estas lactonas de inhibir la desorganización del citoesqueleto mastocitario, mecanismo requerido para la degranulación. La potencia de los efectos inducidos por dehidroleucodina y xantatina es mayor que la del cromoglicato de sodio.