La acción de la tiroxina, estradiol y testoterona modulan la carcinogénesis prostática in vitro.

REY L; CANO R; LÓPEZ FONTANA R; ZYLA L; SANTIANO F; BRUNA F; GOMEZ SE; PISTONE CREYDT V; CARÓN RW; LÓPEZ FONTANA C; LÓPEZ FONTANA G

MENDOZA

Congreso; I Congreso interuniversitario I+D+I Mendoza.; 2021

Red Interuniversitaria I+D+I

El crecimiento y el desarrollo prostático normal y tumoral requieren de la acción coordinada de diversas hormonas, entre ellas: la testosterona, los estrógenos y las hormonas tiroideas (HT). Sin embargo, el rol de las HT en la regulación de la carcinogénesis prostática está relativamente poco explorada, así como su acción conjunta con las hormonas sexuales esteroideas. Por ello, nuestro objetivo fue evaluar la actividad biológica de dichas hormonas sobre la viabilidad, proliferación, adhesión y migración de líneas celulares tumorales andrógeno-dependiente (LNCaP) y andrógeno-independientes (DU145 y PC-3). Las LNCaP fueron cultivadas en DMEMF12 con rojo fenol y suero fetal bovino (SFB) al 10 %; y las DU145 y PC-3 en RPMI 1640 con SFB al 10 %. Cuando llegaron a la confluencia necesaria para cada ensayo fueron tratadas, por separado o en forma combinada, con 10-10 M de T4; 10-9 M de 17β estradiol (E2) y/o 10-8 M de dihidrotestosterona (DHT) preparadas en DMEM/F12 sin rojo fenol con 1 % de SFB charcolizado. Además, se utilizó este medio como control. Se realizaron los siguientes ensayos biológicos:Ensayo de proliferación celular: se determinó la proliferación de las líneas celulares mediante el ensayo de MTT para células vivientes (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide, SIGMA) luego de ser incubadas por 24 h con los diferentes tratamientos hormonales.Ensayo de viabilidad celular: Se sembraron 5x104 células en platos de 12 pocillos. A las 48 h se reemplazó el medio por los distintos tratamientos hormonales y se incubaron por 24h. Posteriormente, fueron tripsinizadas y se evaluó la viabilidad de cada suspensión de células epiteliales con el colorante Azul Tripán. Ensayo de adhesión: las células prostáticas fueron incubadas por 2 h con los tratamientos hormonales. Se tripsinizaron y sembraron 2x104 células/pocillo en medio libre de suero (en placas de 96 pocillos) para permitir adherirse por 1 h a 37 ºC. Luego de este tiempo, las células no adheridas se aspiraron y se realizó un ensayo de MTT.Ensayo de migración celular: el comportamiento y la motilidad de las líneas celulares fueron analizados por el ensayo de cerrado de la herida. Cultivos en monocapa confluentes de las distintas líneas se cortaron con una punta para pipetas de 200 µl. Después de realizar lavados con PBS para remover las células despegadas, se incubaron con los diferentes tratamientos hormonales o medio control por 24 h. Los cultivos fueron observados y fotografiados inmediatamente después del corte y a las de 6 h. Se utilizó el programa Image J (NIH) para cuantificar el área de la herida. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA I y Bonferroni como post test. La significancia estadística se estableció con un p≤ 0,05. La administración de E2 incrementó la proliferación en las células LNCaP y PC-3, sin modificar la proliferación de las células DU145. La combinación de E2 con T4 inhibió el efecto proliferativo del E2 llevándolo por debajo del control, mientras que el tratamiento E2 + DHT y la administración conjunta de las tres hormonas solo bloquearon parcialmente el efecto del E2. En las DU145, si bien el E2 no modificó la proliferación, la combinación de E2 + T4 y E2 + DHT disminuyeron su proliferación respecto al control. Por su parte, el E2 favoreció la viabilidad de las células LNCaP, no así la de las células andrógeno- independientes. Particularmente, se observó una reducción de la viabilidad celular de la DU145 con los tratamientos E2 + T4 o E2 + DHT. Con respecto a la adhesión, la administración de DHT y DHT + T4 estimularon la adhesión de las células LNCaP mientras que todos los tratamientos hormonales, solos o combinados, mermaron la adhesión de las células DU145. No se observaron cambios significativos en la adhesión de las células PC-3. Finalmente, se evidenció un enlentecimiento de la migración que varió según la línea celular: la combinación de T4 + E2 + DHT en las LNCaP; el E2 en las DU145; y la T4 en las PC-3. Si bien la terapia con estrógenos se ha utilizado históricamente para reducir los niveles de andrógenos en los hombres con CaP avanzado (14), estudios más recientes han demostrado su participación en la carcinogénesis prostática (15). Estudios epidemiológicos han observado que altos niveles séricos de estrógenos se asociaron a mayor riesgo de CaP. Los niveles de estrona y E2 son más altos en africanos que en caucásicos los cuales presentan mayor riesgo de CaP. A su vez, los niveles séricos de E2 son un 15 % más altos en Caucásicos que en japoneses. Cabe destacar que la incidencia de CaP se incrementa con la edad donde el ratio testo/estrógenos disminuye un 40 % debido a una declinación de la función testicular y a menor actividad de la 5-α-reductasa y síntesis de DHT. Además, los niveles de E2 aumentan en hombres ancianos por activación de la aromatización de andrógenos adrenales en los tejidos adiposos periféricos. Lo antes expuesto lleva a un estado de estrogenización que favorecería el desarrollo tumoral prostático. El E2 estimula la proliferación y la viabilidad de las células tumorales andrógeno dependientes y de las andrógeno-independiente que expresa ambos receptores de estrógeno (REα y REβ). La combinación con T4 y/o DHT revierten este efecto proliferativo.