Análisis cinético y morfológico de C. necator durante la síntesis y degradación de polihidroxialcanoatos (PHAs) intracelulares

NYGAARD D; YASHCHUK O; HERMIDA EB

Buenos Aires

Congreso; XV Inter- American Congress of Microscopy Societies CIASEM XV y SAMIC VI; 2019

La ascendente comercialización de PHAs se debe a la excelente combinación de sus atributos: termomoldeable, biodegradable y biocompatible, los que permiten el diseño de productos para diversas aplicaciones. Los microorganismos productores almacenan los PHAs en forma de gránulos intracelulares en condiciones de estrés nutricional. El objetivo de este trabajo fue estudiar tanto la cinética y morfología de la cepa productora C. necator como la síntesis y la degradación de gránulos mediante Microscopía Electrónica de Transmisión (MET).El estudio se llevó a cabo en tres etapas. En la etapa 0 se preparó el inóculo de C. necator en medio TFL (Triptona, Levadura, Fructosa) durante 24 h. Durante la etapa 1, las células lavadas se incubaron 72 h en medio productor de PHB. En la etapa 2, se dispusieron las células en medio de degradación de PHB y se incubaron durante 98 h. La duración de las etapas 1 y 2 fue de 170 h en total (Fig. 1).En la etapa 0, C. necator sintetizó de 1 a 6 gránulos de PHA de forma esférica de área máxima de 0,18 µm2. En el inicio de la etapa 1, las células triplicaron y quintuplicaron su largo y área, respectivamente, con formación de hasta 17 gránulos. Luego se dividieron en células más pequeñas con una cantidad de gránulos similar a la etapa 0. Al final de la etapa 1, los gránulos aumentaron su tamaño, con el consecuente aumento del área celular. A las 72 h se observó coalescencia de gránulos, que podía dar lugar a un único gránulo de 0,43 µm2. La etapa 2 se caracterizó por la degradación casi total de los gránulos y disminución del tamaño celular.En conclusión, la técnica MET permitió estudiar la cinética y morfología de las diferentes etapas de acumulación y degradación de gránulos, indispensable para el control del proceso productivo.