Aislamiento y selección de bacterias productoras de polihidroxialcanoatos en la cuenca del rio Reconquista

YASHCHUK O; MONARDO B

Jornada; XVII Jornadas Argentinas de Microbiología y las Jornadas Bioquímicas del Sur Argentino; 2017

Los polihidroxialcanoatos (PHAs) son biopolímeros con las propiedades físicas, químicas y mecánicas similares a las de los plásticos de origen petroquímico con un amplio rango de aplicación en la industria. Para mejorar la producción de estos compuestos con la menor inversión posible, resulta oportuno realizar una selección de bacterias silvestres productoras de PHAs, las cuales pueden ser inducidas para mejorar significativamente la producción de los mismos, respecto de la situación en ambientes naturales, a partir de la modificación del sustrato o la estrategia de alimentación. El estrés generado por el ambiente contaminado puede aumentar considerablemente la producción de PHAs. El rio Reconquista recibe contaminantes en forma directa a través de sus tributarios. Por lo tanto, se propone explorar diferentes ambientes de la cuenca en búsqueda de bacterias productoras de PHAs y seleccionar aquellas que posean mayor grado de producción.Aislamiento presuntivo de las bacterias productoras de PHAs se realizó a partir de las diluciones seriadas de muestras de suelo y agua con la siembra en superficie de agar Nutritivo suplementado con glucosa 1% y colorantes Rojo de Nilo y Azul de Nilo al 0,1% en experimentos paralelos. Las colonias que presentaron fluorescencia rosada o naranja bajo luz ultravioleta durante 72hs se seleccionaron como positivas para la acumulación del polímero. Para evaluar la producción de PHAs por los aislamientos seleccionados se realizó una fermentación tipo batch en caldo base durante 42hs a 30°C y 100rpm. El peso celular se midió por gravimetría. La acumulación cuantitativa de PHB se determinó a partir de muestras digeridas con ácido sulfúrico al 80%, midiendo la absorbancia a 234nm en un espectrofotómetro de UV/Vis. El porcentaje de PHA intracelular se estimó como porcentaje de peso seco de polímero presente en peso seco celular. A partir de las pruebas presuntivas de fluorescencia y tinción de extendidos con Sudan Black, se seleccionaron 10 aislamientos bacterianos con diferentes características macroscópicas del 39 en total. Se evaluó la acumulación cuantitativa de PHAs por los aislamientos obtenidos. La cepa 23 aislada a partir de las muestras de suelo fue seleccionada debido a su mayor potencialidad para producir el polímero. Se obtuvo una producción de biomasa de 3.81 ± 0.3g/l y una producción de biopolímero de 1.99 ± 0.4g/l con el contenido del producto a partir de biomasa de 52,1%. Otras cepas aisladas tuvieron un rendimiento por debajo de 10%. Según el estudio de la secuenciación del 16S rRNA la cepa 23 fue identificada como Bacillus cereus.Es posible obtener PHAs a partir de la microbiota silvestre presente en diferentes ambientes de la cuenca del rio Reconquista. Como trabajos posteriores, se plantea la optimización del medio de cultivo para maximizar la producción de PHAs y obtener un rendimiento que permita su óptima extracción y purificación.