INVESTIGADORES
GONZALEZ MAGLIO Daniel Horacio
congresos y reuniones científicas
Título:
Marcación de inmunoglobulinas con colorantes triazínicos: una alternativa simple y económica
Autor/es:
CELA, ELIANA M; GONZÁLEZ MAGLIO, DANIEL H.; PAZ, MARIELA L.; WEILL, FEDERICO S.; LEONI, JULIANA; FERRARI, ALEJANDRO
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
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Tradicionalmente,
las técnicas inmunológicas de laboratorio utilizan anticuerpos marcados con
enzimas, moléculas fluorescentes, ligandos radiactivos y oro coloidal. Esta
última constituye la única forma de marcación utilizada en técnicas rápidas de
diagnóstico, como el dot blot y la
inmunocromatografía. Sin embargo, a pesar de su versatilidad, este método de
marcación resulta costoso y laborioso, y en la actualidad no hay estrategias
alternativas disponibles.
El
objetivo de este trabajo fue evaluar la factibilidad de marcar anticuerpos con
un colorante triazínico (Red-HB120), por medio de un proceso sencillo y de bajo
costo, para su uso en el diseño de técnicas rápidas de laboratorio.
Este
trabajo se llevó a cabo sobre un sistema conformado por un lisado de E. coli BL21 e inmunoglobulinas (Igs) de
conejo específicas contra el lisado. Para optimizar la marcación, se ensayaron
3 condiciones de pH (8.25, 9.0 y 10.2) y 3 condiciones de tiempo de incubación
(30, 60 y 120 min). En todos los casos, las Igs marcadas fueron separadas del
colorante libre por exclusión molecular. Para cada una de las 9 combinaciones, se
estudió: a) el grado de marcación, por medio de la relación de absortividad entre
el colorante y las Igs (510/280 nm); b) la disminución del título de las Igs
específicas, por ELISA, y c) la intensidad del color final, por dot blot.
Los resultados
mostraron que la marcación a pH 10.2 durante 120 min conduce a una mayor
relación entre colorante e Igs. La titulación por ELISA indicó que, en estas
condiciones, la inmunorreactividad de las Igs solo se ve levemente disminuida.
A su vez, se comprobó que en esas condiciones de marcación, la intensidad de la
coloración obtenida durante un ensayo de dot
blot, es adecuada y máxima.
Se concluye que la
marcación de anticuerpos con colorantes triazínicos resulta una alternativa
viable, económica y sencilla, para la obtención de reactivos de enorme utilidad
en el diseño de técnicas rápidas de inmunodiagnóstico.