Diferenciación de células CD34+ en presencia de monocitos/macrófagos y trombopoyetina

D ATRI P; NEGROTTOS; POZNER R.G; PACIENZA N; LANDONI V.I; GOMEZ RM; TORRES O; ISTURIZ M.A; SCHATTNER M

Mar del Plata Argentina

Congreso; Reunión Anual de la SAI/SAIC; 2006

DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS CD34+ EN PRESENCIA DE MONOCITOS/MACRÓFAGOS Y TROMBOPOYETINA. D ATRI (1) PAOLA, NEGROTTO (1) SOLEDAD, POZNER (1) ROBERTO GABRIEL, PACIENZA (1) NATALIA, LANDONI (1) VERóNICA INES, GóMEZ (2) RICARDO MARTIN, TORRES (1) OSCAR , ISTURIZ (1) MARTíN, SCHATTNER (1) MIRTAAcademia Nacional de Medicina (1) (2) INSTITUTO DE BIOQUíMICA Y BIOLOGíA MOLECULAR, UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA, LA PLATA. El desarrollo de megacariocitos (MCs) es un proceso altamente regulado por el estroma medular. Se ha demostrado en un modelo murino, que la eliminación de macrófagos promueve la megacariocitopoyesis. En este trabajo evaluamos esta regulación en células humanas. Se cultivaron células CD34+ de cordón umbilical en medio IMDM (control) o en medios condicionados (Mc) de monocitos (Mo) obtenidos de sangre periférica. Luego de 12-14 días de estimulación con trombopoyetina se evaluó número total de células y la frecuencia de MCs, Mo y células indiferenciadas (CD61+, 14+ y 34+ respectivamente) por citometría para determinar el número total de cada subpoblación (tabla, media ± ESM x10³, n=9, * p< 0.05 vs. control, # p< 0.05 vs. McMo) El McMo aumentó la generación de MCs y Mo. El incremento de MCs se asoció a un aumento en el número total de células ya que el porcentaje de CD61+ no se vio afectado (76±4 vs. 62±7%). Contrariamente, la población monocítica aumentó tanto por un incremento total de células como por una mayor diferenciación (3±0.5 vs. 23±3%* de células CD14+). No se observaron diferencias en la población de células indiferenciadas. La estimulación de los Mo con LPS o TNF-α mostró efectos contrarios en la generación de MCs. Mientras que el LPS inhibió el número de MCs totales, el tratamiento con TNF-α lo incrementó. Tanto el LPS como el TNF-α aumentaron la generación de Mo. Los efectos mediados por los Mo no estimulados se evidencian al día 14 de cultivo, mientras que aquellos mediados por los Mo estimulados ya se observan al día 7. Resultados similares fueron observados cuando se utilizaron Mc obtenidos de Mo diferenciados a macrófagos luego de 7 días de cultivo. Estos resultados señalan que in vitro, los Mo y macrófagos humanos promueven tanto la generación de MCs como la de Mo. La estimulación de los Mo por mediadores inflamatorios gatilla una mayor proliferación de Mo y regula diferencialmente la generación de MCs. Células totales  MCs totales  Mo totales  Control  63±6  49±6  2±0.4  McMo  119±8*  74±9*  35±5*  McMo (LPS 1 ug/ml)  172±17*,#  27±5*,#  67±11*,#  McMo (TNF 1 ng/ml)  143±18*  110±11*,#  62±12*,#