Expresión de mucR y su rol en la formación de biofilms por Sinorhizobium meliloti

RINAUDI L; SORROCHE F; NIEVAS F; ZORREGUIETA A; GIORDANO W.

Instituto Leloir, Ciudad de Buenos Aires

Taller; Taller integartivo sobre biofilms; 2008

Asociaíón Argentina de Microbilogía y Instituto Leloir

Estudios previos mostraron que las condiciones nutricionales o medioambiantales afectan la transición de estado de vida planctónico a biofilm en Sinorhizobium meliloti (Rinaudi y col., 2006) En S. meliloti, la proteína regulatoria MucR juega un rol clave al controlar la biosíntesis de los exopolisacáridos succinoglicano (EPS I) y galactoglucano (EPS II). Una mutación mucR resulta en la producción de altos niveles de EPS II de alto peso molecular, mientras que son detectadas solo pequeñan cantidades de succinoglicano. De esta forma mucR regula negativamente la transcripción de los genes exp (EPS II) y positivamente la de los genes exo (succinoglicano). Con el objeto de establecer una relación entre la síntesis de polisacáridos y la formación de bioflms, se realizó el estudio de la expresión de mucR utilizando dos enfoques distintos (a traves del uso de una fusión transcripcional y por real time RT-PCR). Se amplificó, clonó y subclonó el promotor mucR en el plásmido pMP220 río arriba del gen lacZ sin promotor. La fusión mucR::lacZ fue introducida en Sinorhizobium melilto Rm1021 por conjugación triparental y fue medida la actividad B-galactosidasa de la cepa bajo diferentes condiciones de cultivo en las que la formación de biofilm en esta cepa se encuantra aumentada. También se midió la expresión de los genes expE2 (EPS II), mucR y exoY (succinoglicano) bajo las mismas condiciones por real time RT-PCR. Los resultados indican que mucR no responde al estado nutricional del medio donde se cultiva la bacteria y que no se encontraría involucrado en la formación de biofilm a través de la regulación de la síntesis de exopolisacáridos.