VHHs específicos para HA de PR8, presentan efecto profiláctico contra la infección con el aislamiento argentino H1N1 A/Argentina/017/2009 adaptado al ratón.

SOSA HOLT, C; BAZTARRICA, J.; BARBIERI, E.S.; ASENZO, G.; IBAÑEZ, ITATI; BAUMEISTER, E.; WIGDOROVITZ, A.; PARREÑO, V.; PUNTEL, M.

Vaquerías - Córdoba

Jornada; XXXVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2018

RAM

El virus Influenza tipo Apertenece a la familia  Orthomyxoviridae ,posee un genoma ARN de 8 segmentos y una alta capacidad de mutagénesis debida  a los conocidos fenómenos de cambios genéticosy  reasociación génica que generan lanecesidad de complementar la formulación de las vacunas con terapiasneutralizantes. Los nano-anticuerpos (VHHs) son moléculas derivadas deanticuerpos presentes en llamas, que se presentan como herramientas atractivaspara su administración en tratamientos de inmunidad pasiva dado su bajo pesomolecular (15kDa) y alta afinidad, especificidad, estabilidad y solubilidad. Previamentehemos descripto 13 clones de VHHs específicos contra la proteína recombinanteHA0 de la cepa viral H1N1 A/Puerto Rico/8/1934 (PR8) que reconocen in vitro, enforma específica tanto a un aislamiento argentino de la cepa pandémica (H1N1A/Argentina/017/2009) (Pdm09) como a la cepa PR8 adaptado al ratón (PR8m). Enel presente trabajo informamos la adaptación a ratón de H1N1Pdm09 (Pdm09M); lacapacidad neutralizante observada in vitro para 5 VHHs, y la eficaciaprofiláctica observada in vivode los VHHs E13 y G41 frente al desafío viral conla cepa Pdm09M en ratones Balb/c hembra de 6 semanas. En cada pasaje setitularon los homogenatos de pulmón por infección sobre células MDCK, tomandopara el siguiente pasaje, la muestra de mayor título. La inoculación se realizóvía intranasal (in) con 50μl/animal, bajo anestesia intraperitoneal (ip) conxilacina-ketamina (5-50 mg/kg). En el pasaje 7 el título viral promedioobservado fue de 1x109, 36 DICT50/ml en el 4 día post-infección (dpi). Segeneró un stock viral de trabajo con una DL50/50μl de 1x10-3,5y un descenso del30% al 7 dpi (6/6 animales). La eficacia profiláctica de los VHHs fue probadapost-inoculación in con 4DL50/50μl de la cepa Pdm09M, 4 horas post-tratamiento.Los tratamientos consistieron en la administración in de E13 o G41(100μg/animal), como controles negativos un grupo tratado con PBS y un grupotratado con VHH no relacionado (VHH contra Norovirus, VHH-NR, 100μg/animal),como control positivo un grupo tratado con suero hiperinmune de ratón inmunizadocon Pdm09. A los 4 dpi, no se observó título infeccioso en el grupo tratado conE13 lo que muestra su alta eficacia porfiláctica, mientras que el grupo G41mostraron títulos virales al igual que los grupos PBS, como el VHH-NR. Lostítulos virales fueron: 1x107, 44 DICT50/ml en el grupo PBS, 1x106,91 DICT50/mlen el grupo VHH-NR, y 1x101,25 DICT50/ml en el grupo tratado con sueropoliclonal. Se observó un descenso máximo de peso a los 7 dpi tanto en el grupoPBS como el grupo VHH-NR. El grupo G41 presentó un título de 1x104, 66DICT50/ml, sin embargo, al igual que el grupo E13, no se detectó descenso depeso lo que podría sugerir que podría ser aplicado para la terapéutica.Asimismo, nuestros resultados reforzarían la hipótesis XXXVIIIReunión CientíficaAnual de la SAV?201817de un potencial cambio en la secuencia de HA0 ocurridodurante el proceso de adaptación del virus al ratón