DESARROLLO DE UN ENSAYO PARA EL TAMIZAJE MOLECULAR DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B

CASAL, PABLO; PÉREZ, GERMÁN R.; BOLATTI, ELISA M.; CHOUHY, DIEGO; TABORDA, MIGUEL A.; GARDIOL, DANIELA; GIRI, ADRIANA A.

Valparaiso

Congreso; XXII Jornadas de Jóvenes Investigadores AUGM; 2014

La transmisión de la infección por el virus de la hepatitis B (HBV) durante el período ventana serológico es una complicación transfusional de gran importancia. En países en desarrollo, los costos de los ensayos moleculares comerciales y la ausencia de desarrollos biotecnológicos regionales dificultan su aplicación en bancos de sangre. Nos propusimos desarrollar un ensayo de bajo costo para el tamizaje molecular de HBV, que incluya un control interno (CI). La metodología posee el siguiente formato: extracción de los ácidos nucleicos; amplificación mediante PCR multiplex (HBV y CI) utilizando cebadores biotinilados; hibridación de los amplicones en fase liquida a sondas específicas conjugadas a fluoresceina; captura de los híbridos a una microplaca revestida con estreptavidina; detección con anticuerpo anti-fluoresceina y un cromóforo; lectura del color. La técnica de PCR multiplex fue optimizada para la coamplificación de HBV y del CI (fago P1), siendo la sensibilidad analítica del ensayo de 15 copias/reacción. Las pruebas realizadas con plasmas de pacientes con hepatitis B aguda, hepatitis B crónica y plasmas negativos mostraron alta especificidad y sensibilidad. Este ensayo provee un sistema sensible, específico y de bajo costo para su aplicación en el tamizaje virológico en bancos de sangre. La validación definitiva del método se realizara con el segundo Estándar Internacional de DNA de HBV, elaborado por la Organización Mundial de la Salud.