Análisis de la contribucion de factores celulares y virales en los procesos de transformación maligna asociados a infecciones por papillomavirus humanos

BERCOFF MAYARÍ; CAVATORTA ANA L; CHOUHY DIEGO; NOCITO ANA L; GARDIOL DANIELA; GIRI ADRIANA A

Rosario

Congreso; VII Congreso y XXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2005

Sociedad de Biología de Rosario

Los Papillomavirus humanos (HPV) son un grupo de virus no envueltos con genoma a ADN doble hebra circular. Los HPVs de alto riesgo (HPV-AR) que infectan mucosas genitales, tal como el HPV-16, se encuentran estrechamente asociados al desarrollo de cáncer cervical de carácter invasor. El genoma de los HPV-AR es mantenido en forma episomal en lesiones benignas mientras que en lesiones de alto grado y en carcinomas cervicales se encuentra integrado al genoma celular. La integración es considerada un evento clave en la progresión a cáncer ya que conduce a la ruptura del gen viral E2, el cual codifica para una proteína represora de la expresión de las oncoproteínas E6 y E7. E6 estimula la degradación de proteínas reguladoras celulares, tal como el oncosupresor Drosophila disc large (Dlg). Dlg interviene en las interacciones célula-célula y su desregulación conlleva a alteraciones de la adhesión, polaridad y proliferación celular. El objetivo general de este trabajo es el estudio de los mecanismos moleculares de las infecciones por HPV que contribuyen al desarrollo de cáncer. En particular, evaluamos la contribución de la actividad oncogénica de E6 analizando la expresión de Dlg en muestras histológicas derivadas de lesiones cervicales asociadas a HPV-AR por inmunohistoquímica. Los resultados demostraron que Dlg se expresa con un patrón de distribución celular diferente al del tejido normal en las lesiones intraepiteliales cervicales, mientras que se observó una marcada reducción en sus niveles en los carcinomas invasores. Para estudiar la importancia de la integración del ADN viral en la progresión a cáncer, diseñamos un ensayo de co-amplificación génica de fragmentos de E2 y E6 de HPV-16 y revelado colorimétrico. La optimización se efectuó con el plásmido pW12, que posee el genoma completo de HPV-16. La sensibilidad analítica del ensayo para cada fragmento génico fue de 50 copias/reacción. El cociente E2/E6 permitirá dilucidar la contribución del estado físico viral en la degradación de Dlg en las diferentes lesiones intraepiteliales y en los procesos de progresión maligna asociados a HPV.